酶切位点怎么选择?将突变片段连接到质粒上

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/17 22:43:46

酶切位点怎么选择?将突变片段连接到质粒上
酶切位点怎么选择?
将突变片段连接到质粒上

酶切位点怎么选择?将突变片段连接到质粒上
酶切位点的距离太小(小于10bp),影响限制性内切酶对切点的识别,不利于空载体的双酶切(会切不开哟!)
(1)一般目的基因用于克隆表达的情况下,酶切位点的选择要考虑到:
目的基因片段内部不含有所选的酶切位点(不然鉴定阳性重组子双酶切时会将目的基因切断)
(2)实验后继应用的所有载体(真核、原核、酵母、昆虫)都尽可能含有所选的酶切位点.并且要保证在载体上的插入方向正确(定向克隆).(不然换载体表达时,还要重新设计引物,以引进新的酶切位点)
(3)尽可能选比较常用的酶切位点.(常用切点酶的价格比较便宜)

酶切位点怎么选择?将突变片段连接到质粒上 如何使目的基因连接到质粒载体上,目的基因怎么获得呢?如果我要一种细胞因子的基因,怎样才能得到呢?应该选择什么样的质粒载体呢? 构建的质粒,菌液PCR正确,质粒电泳却什么都没有,是怎么回事?我要将一个片段连接到载体上,片段长度:2588bp,载体:2686bp,是平末端链接,4度过夜,然后转化DH5a,蓝白筛选,用菌液PCR验证,引物用的 我想问一个问题,我将一个目的基因连接到质粒上 我想将这个质粒连同目的基因,一块扩增很多个用什么方法. 如果我把目的基因连接到质粒载体上,这个载体质粒又有多个启动子,我怎么知道它用那个启动的呢 监控探头怎么连接到电脑上 关于含目的基因受体的筛选的问题将切割后的质粒和目的基因片段混合,会出现三种情况:质粒自连,目的基因自连,质粒和目的基因连在一起,而利用质粒上的标记基因如四环素的抗性基因进行 把目的基因连接到质粒上构建重组质粒时该如何选择限制性内切酶?引物如何设计?质粒酶切位点有BamHI,EcoRI,HindIII,Pstl,Smal,Xbal,Xhoi,目的基因上有BamHI,BgII,Smal,Xmal 等,重组时该选哪个限制性内切酶 生物学家从人细胞中分离出一个基因并将其连接到一种质粒上,而后将该质粒转导入细菌中.该细菌经培养后,经检测证明该细菌产生了一种新蛋白质,但是此蛋白质不是人细胞中正常产生的蛋白 空调插头的三根线怎么连接到插头上? 在EIB202上插入跳跃基因使其突变,出现突变的表型,但经PCR后,电泳显示上面无使其突变的基因片段.在EIB202上接合含有阿拉伯糖操纵子的质粒,经过培养,挑出产生突变型的突变株,但是经过PCR,在 如何将导航仪上的声音连接到汽车音响上 如何证明基因突变是发生在质粒上?染色体上?还是染色体和质粒上都发生了突变? 我的目的片段连T载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR能P出目的片段,再提质粒用Ecor1做酶切,片段变小怎么回 在设计引物酶切位点时,是不是在选定的质粒上随便选两个酶切位点?如果目的基因片段中没有质粒上的这些酶切位点 如何将DN25的水管连接到DN15的龙头上 将交流电磁铁连接到相同电压的直流电源上,电磁铁为什么被烧坏? 英语翻译本文通过PCR、转化、提质粒、酶切、连主要接、纯化等步骤构建了质粒pET28a-NULP1.先通过PCR扩增出了nulp1,并将nulp1连接入pMD18-T载体酶切检测并测序,得到正确的nulp1,再将nulp1连接到pET-28