如何使目的基因连接到质粒载体上,目的基因怎么获得呢?如果我要一种细胞因子的基因,怎样才能得到呢?应该选择什么样的质粒载体呢?

如何使目的基因连接到质粒载体上,目的基因怎么获得呢?如果我要一种细胞因子的基因,怎样才能得到呢?应该选择什么样的质粒载体呢? 如果我把目的基因连接到质粒载体上,这个载体质粒又有多个启动子,我怎么知道它用那个启动的呢 我想问一个问题,我将一个目的基因连接到质粒上 我想将这个质粒连同目的基因,一块扩增很多个用什么方法. 有现成的质粒,无原始的菌种或菌液,如何对质粒进行扩增?目的基因先后连接到T载体和表达载体之后,接种到培养液中,培养液在摇床上培养12-16h后提取的质粒.现在质粒快用完了,但是目的基因 有别人构建好的含有目的基因的表达载体质粒,但是只知道目的基因的mRNA序列,如何做PCR检测目的基因? 目的基因能否在质粒上 在构建基因表达载体时候,怎么利用选择培养基鉴别是质粒—质粒,目的基因—目的基因,还是质粒—目的基因 把目的基因连接到质粒上构建重组质粒时该如何选择限制性内切酶?引物如何设计?质粒酶切位点有BamHI,EcoRI,HindIII,Pstl,Smal,Xbal,Xhoi,目的基因上有BamHI,BgII,Smal,Xmal 等,重组时该选哪个限制性内切酶 如何验证载体质粒的酶切位点已被切开?PCR产物（目的基因）被酶切开? 载体中有启动子和终止子,如何将目的基因中的启动子和终止子去掉?并连接到载体中 目的基因未连接到克隆载体上这是为什么?我用的克隆载体是PMD-18! 如何将目的基因和质粒结合成重组质粒 用同种限制酶切质粒和目的基因DNA,连接后,产生的载体-载体连接物不是也有标记基因而且在培养基上生长吗怎么筛选这种呢? 采用质粒载体克隆目的基因,请问如何准确筛选出带有目的基因的阳性克隆?实验方案和基本流程? 关于含目的基因受体的筛选的问题将切割后的质粒和目的基因片段混合,会出现三种情况：质粒自连,目的基因自连,质粒和目的基因连在一起,而利用质粒上的标记基因如四环素的抗性基因进行 在基因表达构建载体中什么切割质粒什么切割目的基因,为什么? 怎样防止目的基因和载体的自连 RT-PCR出一段目的基因,为什么要把它先TA克隆呢?为什么不能直接把它连接到相应的质粒上呢TA克隆的意义是什么呢?能否讲通俗点呢?如果不进行TA克隆,直接酶切连接到相应的载体上,再筛选阳性