构建的质粒,菌液PCR正确,质粒电泳却什么都没有,是怎么回事?我要将一个片段连接到载体上,片段长度:2588bp,载体:2686bp,是平末端链接,4度过夜,然后转化DH5a,蓝白筛选,用菌液PCR验证,引物用的

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/08 19:32:34

构建的质粒,菌液PCR正确,质粒电泳却什么都没有,是怎么回事?我要将一个片段连接到载体上,片段长度:2588bp,载体:2686bp,是平末端链接,4度过夜,然后转化DH5a,蓝白筛选,用菌液PCR验证,引物用的
构建的质粒,菌液PCR正确,质粒电泳却什么都没有,是怎么回事?
我要将一个片段连接到载体上,片段长度:2588bp,载体:2686bp,是平末端链接,4度过夜,然后转化DH5a,蓝白筛选,用菌液PCR验证,引物用的是原来扩增片段的引物,扩出来的条带与阳性对照相同,应该就是正确的了,但是我提取质粒电泳却什么都没有,用质粒当模板PCR也没有扩出来,但是却可以测到有浓度,40ng/ul,跑了几次电泳都没有,这让我很是费解,

构建的质粒,菌液PCR正确,质粒电泳却什么都没有,是怎么回事?我要将一个片段连接到载体上,片段长度:2588bp,载体:2686bp,是平末端链接,4度过夜,然后转化DH5a,蓝白筛选,用菌液PCR验证,引物用的
40太低了,质粒小抽一般能够达到200ng/ul左右,40ng/ul的浓度去跑电泳当然看不出来的啊.

我觉得浓度做PCR是够的吧,可能是构建中出现问题了。

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