在做PCR实验时为什么总是P不出条带?

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/11/08 21:41:02

在做PCR实验时为什么总是P不出条带?
在做PCR实验时为什么总是P不出条带?

在做PCR实验时为什么总是P不出条带?
普通PCR的话有很多影响因素.比如说酶,退火温度,引物设计,变性温度等很多问题.首先说你的模板是不是很复杂,需不需要加入额外的GC enhancer,或者提高预变性的温度.在者,你的退火温度是否合适,一般会选择引物Tm值-5度左右,不行的话可以做一个梯度PCR.然后不你的酶是不是合适,长片段的要长片段的酶,高保真时要保真度高的酶,而Taq酶就很容易做出来了.

情况比较复杂，你得确认1.你的RNA没问题，没有被降解，cDNA合成没问题。可以用该材料的actin引物做PCR检测试试。2你P的基因如果是已知序列，那么设计引物应该很简单，如果是未知的，那么兼并引物没P出东西来是有可能的。若是根据已知序列设计的引物而没有P出产物那就是你PCR体系或者Tm有问题了，试试TOUCHDOWN程序。若是兼并引物，采用touchdown程序，没有P出来的话，要么是引物不行...

全部展开

收起

在做PCR实验时为什么总是P不出条带? PCR分子标记时,为什么条带总是不清楚呢? PCR的时候用普通Taq酶能P出的东西,为什么换了高保真酶之后,同样的循环条件为什么P不出条带? [PCR,RT-PCR,质粒构建,求助]PCR的时候用普通Taq酶能P出的东西,为什么换了高保真酶之后,同样的循环条件为什么P不出条带? 高保真酶的PCR结果我之前用TAKARA公司的Ex-Tag酶进行PCR,可以P出较好的条带,但用了TAKARA公司的高保真酶Prime STAR GXL DNA polymerase 之后,完全看不到条带,这是为什么呢?实验做的很郁闷呢, 基因的PCR扩增实验扩增不出DNA条带是什么原因? 菌液PCR的时候能P出目的条带,为什么测序却完全不正确? [菌液PCR,测序,DNA提取,求助]菌液PCR的时候能P出目的条带,为什么测序却完全不正确? 在做荧光定量PCR时,PCR仪检测不到荧光信号,但是产物用琼脂糖电泳后有清晰的目的条带,请问这是为什么? PCR没P出条带很迷茫提了总RNA之后然后做了反转录接着用cDNA p一基因跑胶时质粒有但没有p的基因为什么做了好几次您好!我需要从cDNA调取一段基因,引物已经设计好,在PCR过程中不知如何调整体系,P不出目的条带?您好!我需要从cDNA调取一段基因,引物已经设计好,在PCR过程中不知如何调整体系,P不出目的条带? tail-pcr的阴性对照出了条带,而加模板的却没出来,怎么回事啊?不知道阴性被什么污染了,出了比较亮的条带,而模板做的tail-pcr却没出来条带,上次做时,都正常,请高手指点一下! 菌落PCR有关问题?我们做了转化实验,将转化后的菌涂在含Kan抗性的平板上,为什么挑取能生长的菌落做PCR没有目的条带? PCR实验P不出来染色体步移法PCR某个基因为什么第一次第二次第三次所P出的条带大小呈现递减? 我做转基因植物,最近一直做PCR鉴定,但只有引物二聚体,原因会有哪些?转同样的基因,在转基因烟草的PCR鉴定时,能P出目的条带,而且我用的是相同的条件来做我的却得不到结果.会不会和物种有 PCR无法P出目的条带最近在做PCR,提取的基因组为模板,基因组序列上从NCBI上找的,没有错.但是无论如何换引物和PCR条件,都会得到一条比目的片段大500bp左右的亮条带.（引物换了很多对儿,卡的革兰氏阳性菌PCR革兰氏阳性菌如何做菌落PCR?煮20 min后,还是不能P出目的条带.