用菌斑跑PCR有目的条带,用菌液怎么就跑不出?我用农杆菌菌斑稀释后跑PCR,电泳有目的条带,提质粒也有,为什么用菌液就跑不出呢?与目的基因连在同一载体上的筛选基因用菌液跑却每次都能跑

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/08 18:01:41

用菌斑跑PCR有目的条带,用菌液怎么就跑不出?我用农杆菌菌斑稀释后跑PCR,电泳有目的条带,提质粒也有,为什么用菌液就跑不出呢?与目的基因连在同一载体上的筛选基因用菌液跑却每次都能跑
用菌斑跑PCR有目的条带,用菌液怎么就跑不出?
我用农杆菌菌斑稀释后跑PCR,电泳有目的条带,提质粒也有,为什么用菌液就跑不出呢?与目的基因连在同一载体上的筛选基因用菌液跑却每次都能跑出.

用菌斑跑PCR有目的条带,用菌液怎么就跑不出?我用农杆菌菌斑稀释后跑PCR,电泳有目的条带,提质粒也有,为什么用菌液就跑不出呢?与目的基因连在同一载体上的筛选基因用菌液跑却每次都能跑
就只是你的目的基因菌液PCR扩增不出来么?
不过我觉得你如果质粒、电泳、菌落PCR都能验证的话,菌液PCR结果如何都意义不大了.

你用脓杆菌中提出来的质粒做个PCR呀,如果有的话,就没关系,实在不放心去测序验证;
如果脓杆菌中提出质粒PCR没有带的话,很可能原来你转化农杆菌的质粒中混有空载体,或者质粒转进脓杆菌后发生了重组,导致目的片断的丢失,所以你能扩出抗性基因(因为有筛选压力在,抗性基因一般不会丢),而目的基因跑不出;你用菌斑跑PCR是能跑出,很可能因为转化农杆菌用的质粒较多,使得培养基和细菌表面都有很多没转进去...

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你用脓杆菌中提出来的质粒做个PCR呀,如果有的话,就没关系,实在不放心去测序验证;
如果脓杆菌中提出质粒PCR没有带的话,很可能原来你转化农杆菌的质粒中混有空载体,或者质粒转进脓杆菌后发生了重组,导致目的片断的丢失,所以你能扩出抗性基因(因为有筛选压力在,抗性基因一般不会丢),而目的基因跑不出;你用菌斑跑PCR是能跑出,很可能因为转化农杆菌用的质粒较多,使得培养基和细菌表面都有很多没转进去的目的质粒,可以作为模板,扩出目的带,而用菌液时,细菌表面的质粒已被稀释了很多倍,所以P不出来,或者带很弱。

收起

你设了什么阳性、阴性对照没有

用菌斑跑PCR有目的条带,用菌液怎么就跑不出?我用农杆菌菌斑稀释后跑PCR,电泳有目的条带,提质粒也有,为什么用菌液就跑不出呢?与目的基因连在同一载体上的筛选基因用菌液跑却每次都能跑 PCR有扩出来条带,但目的条带不是太亮就有什么原因 【求助】菌落PCR有目的条带与菌液PCR却什么都没有? 【求助】菌落PCR有目的条带与菌液PCR却什么都没有? sscp怎么辨别目的条带和非目的条带我做PCR-sscp,银染之后发现有很多条带,但不知道哪个才是目的条带变性后的结果,有一种条带比较亮,下面还有不是很亮的,而且好像有多态. PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带 PCR跑出的条带与目的条带不同怎么办 PCR后电泳有清晰条带,回收之后酶切,再电泳就没有条带了,怎么回事?PCR后电泳有清晰目的条带,回收之后酶切,再电泳就没有条带了,怎么回事?大概有几种可能性?这个实验本来是别人做的,因为 提取细菌DNA检测到有条带,PCR后无条带;而基因组DNA检测到无条带的,PCR后却有条带.怎么解释? 单克隆验证,菌液PCR有目的条带的位置,但是质粒PCR后,却没有批出我的目的条带这是为什么呀 关于PCR的问题:PCR如果目的基因扩增出来了是不是条带中的引物二聚体就没有了呀? 菌落pcr假阳性如图,菌落pcr,2-6道扩增0.9kb目的条带,7-12扩增1.0kb目的条带.7,8道扩增的1.0kb有点偏离,9道为非特异性扩增,12道在1.0kb位置有隐约条带,是否为非特异性扩增?mark跑直线,而条带两端上扬 请问谁有PCR扩增目的条带 连接 转化的具体步骤呀 RT PCR只跑出内参的条带,没有目的基因,原因有哪些? 如何消除PCR的拖尾PCR扩增出来有目的条带,但是有拖尾,呈弥散片 我的目的片段连载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR,没有条带. PCR后跑胶结果受产物温度影响吗我是上午跑的胶,跑出了目的条带和非特异性条带。到了下午我叫别人跑了一下,就只得到了一条目的条带了。这事这么回事啊!(难道是人品)他说就只是 进行PCR扩增为什么扩不出目的片段?就连非特异性条带也没有,引物与模板分得清清楚楚