用菌斑跑PCR有目的条带,用菌液怎么就跑不出?我用农杆菌菌斑稀释后跑PCR,电泳有目的条带,提质粒也有,为什么用菌液就跑不出呢?与目的基因连在同一载体上的筛选基因用菌液跑却每次都能跑
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/08 18:01:41
用菌斑跑PCR有目的条带,用菌液怎么就跑不出?我用农杆菌菌斑稀释后跑PCR,电泳有目的条带,提质粒也有,为什么用菌液就跑不出呢?与目的基因连在同一载体上的筛选基因用菌液跑却每次都能跑
用菌斑跑PCR有目的条带,用菌液怎么就跑不出?
我用农杆菌菌斑稀释后跑PCR,电泳有目的条带,提质粒也有,为什么用菌液就跑不出呢?与目的基因连在同一载体上的筛选基因用菌液跑却每次都能跑出.
用菌斑跑PCR有目的条带,用菌液怎么就跑不出?我用农杆菌菌斑稀释后跑PCR,电泳有目的条带,提质粒也有,为什么用菌液就跑不出呢?与目的基因连在同一载体上的筛选基因用菌液跑却每次都能跑
就只是你的目的基因菌液PCR扩增不出来么?
不过我觉得你如果质粒、电泳、菌落PCR都能验证的话,菌液PCR结果如何都意义不大了.
你用脓杆菌中提出来的质粒做个PCR呀,如果有的话,就没关系,实在不放心去测序验证;
如果脓杆菌中提出质粒PCR没有带的话,很可能原来你转化农杆菌的质粒中混有空载体,或者质粒转进脓杆菌后发生了重组,导致目的片断的丢失,所以你能扩出抗性基因(因为有筛选压力在,抗性基因一般不会丢),而目的基因跑不出;你用菌斑跑PCR是能跑出,很可能因为转化农杆菌用的质粒较多,使得培养基和细菌表面都有很多没转进去...
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你用脓杆菌中提出来的质粒做个PCR呀,如果有的话,就没关系,实在不放心去测序验证;
如果脓杆菌中提出质粒PCR没有带的话,很可能原来你转化农杆菌的质粒中混有空载体,或者质粒转进脓杆菌后发生了重组,导致目的片断的丢失,所以你能扩出抗性基因(因为有筛选压力在,抗性基因一般不会丢),而目的基因跑不出;你用菌斑跑PCR是能跑出,很可能因为转化农杆菌用的质粒较多,使得培养基和细菌表面都有很多没转进去的目的质粒,可以作为模板,扩出目的带,而用菌液时,细菌表面的质粒已被稀释了很多倍,所以P不出来,或者带很弱。
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你设了什么阳性、阴性对照没有