请问谁有PCR扩增目的条带 连接 转化的具体步骤呀
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/08/29 04:02:04
请问谁有PCR扩增目的条带 连接 转化的具体步骤呀
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请问谁有PCR扩增目的条带 连接 转化的具体步骤呀
问师兄师姐~
1.PCR扩增目的条带
50ulPCR反应体系:
5*Prime STAR Buffer(My2+ Plus) 10ul
dNTP Mixture 4ul
Prime 1 1ul
Prime 2 1ul
模版 ...
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1.PCR扩增目的条带
50ulPCR反应体系:
5*Prime STAR Buffer(My2+ Plus) 10ul
dNTP Mixture 4ul
Prime 1 1ul
Prime 2 1ul
模版 1ul
Prime STAR HS DNA Polymerase 0.5ul
ddH2O 32.5ul
PCR仪参数设定:
1 cycle 94℃, 4min
25 cycles 94℃, 30 sec
Tm , 15 sec
72℃, 1*片段长度(kb)min
1cycle 72℃, 10min
2.连接
按照连接酶说明书上配置连接体系,16℃连接过夜
3.转化
将感受态50ul与10ul链接产物混合,冰上放置30min,然后42℃水浴90s。冰上冷却3-5min后,加入1ml培养基,37℃振荡培养1h。离心去上清(留100ul)涂布与含有抗生素的平板上,培养16h-24h
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