斑马鱼的内参基因组怎么选择啊?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/18 01:42:03

斑马鱼的内参基因组怎么选择啊?
斑马鱼的内参基因组怎么选择啊?

斑马鱼的内参基因组怎么选择啊?
最近我做了荧光定量PCR,每次做的时候溶解曲线效果就很差,不是单一的峰,说明是有非特异性的扩增,但是在普通PCR仪上做的PCR时,只显示了一条带,很清晰,是怎么回事啊?荧光定量的灵敏度太大了么?还有斑马鱼的内参基因怎么选取?做的是相对定量. 答：你说对了,荧光定量的灵敏度太大了.你要明白件事情,EB染色的情况下,在电泳上要形成一个条带的前提是存在5ng的DNA,也就是,如果你的非特异性扩增产物低于5ng的话,你在电泳上是观察不到的,但是SYBR Green染色的情况下,定量PCR可以检测到. 你具体PCR的条件我不是很清楚,但是你可以考虑通过以下几个方面来优化,一个是延长解链时间,保证DNA的充分解链,延长扩增时间,保证扩增的完整性,提高退火温度,减少引物和模板的非特异性结合.此外,你的RNA在反转录前用DNase处理,减少基因组的污染,也有助于提高扩增的特异性. 你如果检测相对表达,最理想的状态,干脆用特异性引物来反转录,事实上,虽然很多人做相对定量都习惯于用随机引物或者是ologo dT来反转录,但是从结果上讲,使用特异引物做反转录最后拿到的结果要更可靠,也更具有特异性.只是反转录的试剂消耗要加倍的,同一个样品你必须单独反转录内参基因和目的基因.如果你要检测其他目的基因,相应消耗更多. 至于内参基因,一般动物细胞的那几个内参基因,Acin,Tubulin, RPL32之类的,最好你能预先检测一下,挑一个最稳定的出来.不要随便用,没有全部通用的内参基因的. ……………… 详细资料请参考：on http://www.bio1000.com/zt/dna/225150.html

斑马鱼的内参基因组怎么选择啊? 谁知道斑马鱼的基因组在哪儿查, 还想再向您请教下 关于荧光定量PCR 相对定量内参基因的选择,如果我想用18SrRNA,我该怎么得到这个内参呢 做RT-PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因啊? 斑马怎么睡的 斑马鱼怎么养? 斑马鱼怎么繁殖? 斑马鱼怎么繁殖 反转录RT-PCR的内参如何选择? 斑马的英语怎么写 斑马的英语单词怎么写 怎么辨别斑马的性别 斑马螺的寿命多少,怎么繁殖啊!观赏螺 斑马纹花怎么养殖斑马纹花就是叶子上面的花纹好似斑马图案 我要做CTGF和BMP-7的反转录RT-PCR,引物如何设计?内参怎么选择?GAPDH和b-actin哪个能用? 打算用斑马鱼基因组做reverse PCR,用什么内切酶打断基因组合适?我有一批转基因斑马鱼,现在想分析外源基因的插入位点,初步打算用reverse PCR实现. 想请问一下各位有类似经历的前辈们一般 内参基因是怎么挑选的,我做的是昆虫,不同昆虫用一样的内参吗? 提细菌基因组的CATB/NaCl溶液怎么配啊?