挑克隆鉴定时PCR有目的条带但是酶切没有做分子克隆时,铺板长出很多菌落,于是挑克隆鉴定.PCR扩增目的基因有目的条带,但是酶切重组质粒又只有一条带,酶切时间已经延长至过夜了.挑了好多

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/09 04:55:05

挑克隆鉴定时PCR有目的条带但是酶切没有做分子克隆时,铺板长出很多菌落,于是挑克隆鉴定.PCR扩增目的基因有目的条带,但是酶切重组质粒又只有一条带,酶切时间已经延长至过夜了.挑了好多
挑克隆鉴定时PCR有目的条带但是酶切没有
做分子克隆时,铺板长出很多菌落,于是挑克隆鉴定.PCR扩增目的基因有目的条带,但是酶切重组质粒又只有一条带,酶切时间已经延长至过夜了.挑了好多克隆都是这样,

挑克隆鉴定时PCR有目的条带但是酶切没有做分子克隆时,铺板长出很多菌落,于是挑克隆鉴定.PCR扩增目的基因有目的条带,但是酶切重组质粒又只有一条带,酶切时间已经延长至过夜了.挑了好多
可能原因:
1.PCR扩增的是假克隆,因为PCR验证的可靠性不稳定.
2.质粒中酶切位点变异
你可以做如下实验:
1.看重组质粒的大小是不是比原始质粒大
2.用提出的质粒做pcr,这样比较可靠,用细菌做pcr的假阳性极高
3.用别的酶再试一下,是否能切出目的片段.
祝实验成功

挑克隆鉴定时PCR有目的条带但是酶切没有做分子克隆时,铺板长出很多菌落,于是挑克隆鉴定.PCR扩增目的基因有目的条带,但是酶切重组质粒又只有一条带,酶切时间已经延长至过夜了.挑了好多 分子克隆的时候,提出的质粒用菌落PCR是阳性的,但是酶切鉴定的时候却没有切出来目的条带,是怎么回事呢? 酶切后PCR一条带都没有 但原质粒PCR有条带 为什么做MUCIN基因 从扩增、 切胶纯化、 加A 、T载体链接、 转入感受态 到挑克隆鉴定出阳性克隆 最后提质粒 取一部分提出的质粒双酶切 质粒与酶 单克隆验证,菌液PCR有目的条带的位置,但是质粒PCR后,却没有批出我的目的条带这是为什么呀 PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带 【求助】菌落PCR有目的条带与菌液PCR却什么都没有? 【求助】菌落PCR有目的条带与菌液PCR却什么都没有? 为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急加点 kml?但是我转化后菌落长的还可以啊.酶切目的带在1000左右,质粒PCR在750左右了 PCR后电泳有清晰条带,回收之后酶切,再电泳就没有条带了,怎么回事?PCR后电泳有清晰目的条带,回收之后酶切,再电泳就没有条带了,怎么回事?大概有几种可能性?这个实验本来是别人做的,因为 高保真酶PCR没有结果我用高保真酶做PCR的时候没有目的条带,但是同样的条件下用Taq酶条带就很亮,这是为什么呢? 在做荧光定量PCR时,PCR仪检测不到荧光信号,但是产物用琼脂糖电泳后有清晰的目的条带,请问这是为什么? 如何消除PCR的拖尾PCR扩增出来有目的条带,但是有拖尾,呈弥散片 普通PCR加模板和不加模板的两组在相同位置有带,但是都没有目的条带,什么原因 RT PCR只跑出内参的条带,没有目的基因,原因有哪些? 菌液pcr检测目的条带很明显但是有弱杂带是怎么回事 PCR产物电泳鉴定时Marker条带竟然没有.我前两天跑电泳的时候,PCR产物倒是能看到条带,就是marker条带没有了,不晓得是怎么回事?以前跑电泳时,Marker条带都很清晰的. 我的目的片段连载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR,没有条带. 普通PCR 为什么只有引物二聚体没有目的条带?