荧光PCR时ct值大于30?现在在做荧光pcr,细胞的,12孔板,但是进行扩增时发现ct值大于30,一般在35左右,之后将循环数设置为60,才能见到完美的曲线,请教大家分析下出现的原因,附上溶解曲线和扩增

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/16 19:58:41

荧光PCR时ct值大于30?现在在做荧光pcr,细胞的,12孔板,但是进行扩增时发现ct值大于30,一般在35左右,之后将循环数设置为60,才能见到完美的曲线,请教大家分析下出现的原因,附上溶解曲线和扩增
荧光PCR时ct值大于30?
现在在做荧光pcr,细胞的,12孔板,但是进行扩增时发现ct值大于30,一般在35左右,之后将循环数设置为60,才能见到完美的曲线,请教大家分析下出现的原因,附上溶解曲线和扩增曲线,我的猜测是cdna含量太低导致的,引物设计使用primer 6.0 长度在200bp.
其余 图片请大家移步 我的空间 这儿只能插入一张
逆转录体系是20ul,rna加入量是1ug,cdna加入量是5ul,没有进行稀释,使用toyobo试剂盒,之前进行过阴性实验,无二聚体形成,引物设计使用primer6.

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看了你空间里的溶解曲线,你可以看到溶解峰的温度都很低,全在80以下,你扩出来的东西多半只是引物,你跑定量的时候有做NTC的孔吗,如果有做,可以对照NTC组和加了模板的组,溶解峰还是一样的话,那你扩出来的产物100%是引物了.
再有,你的扩增曲线问题,CT太了,一般做定量认为CT=25时,是一个模板扩出来的,所以当大于25扩出来的结果都不可信.
还有,你反转录的时候RNA加多少,2微克?,反转录体系是多少,20微升?反转录之后按照多少比例稀释,1比4?
总之,问题可以再问详细一点,也可以直接HI我
如果做过NTC那溶解峰就没问题了,而且都很单一,特异性蛮好的.没稀释的cDNA做的定量,CT大于30?你P的什么基因呢,表达量也太低了吧,内参的CT呢,也是这么低吗

荧光PCR时ct值大于30?现在在做荧光pcr,细胞的,12孔板,但是进行扩增时发现ct值大于30,一般在35左右,之后将循环数设置为60,才能见到完美的曲线,请教大家分析下出现的原因,附上溶解曲线和扩增 定量pcr CT请问做荧光定量PCR时,CT值的结果在30左右,而不是20-25之间,这样的结果可信吗 请问：做荧光定量PCR时,△△Ct值是什么意思,它的计算公式是什么? 请问我在做荧光定量pcr的时候内参的ct值很低大约在35左右,而目的基因ct值在25左右 我在医院做了个荧光定量pcr检测,检查的是妇科,检查结果写的是“荧光定量pcr检测衣原体dna,ct值no ct,结果 阴性；荧光定量pcr检测支原体dna,ct值25.18,结果 阳性”请问这个检查表示什么意思?我 求助关于荧光定量PCR的CT值问题 荧光定量PCR检测时的CT值怎么确定的 我要用CT法做荧光定量PCR,请问需要做标准曲线吗?关于浓度,是不是在反转录时将RNA浓度调一致? 我做荧光定量pcr taqman 探针,标准曲线不好,ct值没有按等差数列增加,怎么办? ABI STEPONE 做荧光PCR,可以用圆盖的八联管吗?会不会影响CT值或者是盖子被压到? 有哪位老师在阅微基因做荧光定量PCR呢?现在想做荧光定量PCR,朋友介绍去阅微基因,来交流下, 在做荧光定量PCR时,PCR仪检测不到荧光信号,但是产物用琼脂糖电泳后有清晰的目的条带,请问这是为什么? 荧光定量PCR哪个公司做的好?阅微基因在荧光定量PCR做的效果如何? 荧光定量pcr,机器自动给出的阈值线很低做荧光定量pcr时,仪器自动给出的阈值线很低,只有零点几,请问这样得出的Ct值可以用吗? 荧光定量PCR结果CT值输出问题荧光定量PCR程序设定的是absence/presence,得到的结果没有CT值,请问是这个程序本来就不会显示CT值,还是输出值的方法有问题? 实时荧光定量pcr数据如何统计?近日做实时荧光定量pcr,得到了不同的ct值,只是计算了△△ct以及2-△△ ct的值,但是我不知道如何使用spss进行统计分析,看到别人的文章都是均数±标准差的形式, 荧光PCR时,浓度相差10倍,CT值相差3.3,是如何计算的.原理是怎样,公式我知道,不理解原理 请问：实时荧光PCR进行SNP检测时,基因分型电脑可以直接出结果吗?还是要根据Ct值等来人工分析?