作业帮全基因组DNA双酶切,没有弥散条带或者条带异常全基因组DNA双酶切（HpaⅡ和EcoRⅠ、MspⅠ和EcoRⅠ,110V琼脂糖电泳没有弥散条带,加大DNA的量酶切后,条带异常和从前不同.酶切产物连接完,做PCR扩增
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/15 01:14:44
全基因组DNA双酶切,没有弥散条带或者条带异常全基因组DNA双酶切（HpaⅡ和EcoRⅠ、MspⅠ和EcoRⅠ,110V琼脂糖电泳没有弥散条带,加大DNA的量酶切后,条带异常和从前不同.酶切产物连接完,做PCR扩增
全基因组DNA双酶切,没有弥散条带或者条带异常
全基因组DNA双酶切（HpaⅡ和EcoRⅠ、MspⅠ和EcoRⅠ,110V琼脂糖电泳没有弥散条带,加大DNA的量酶切后,条带异常和从前不同.酶切产物连接完,做PCR扩增也扩不出条带,或者条带太少.
我的酶产品是Promega买的,已经用了半年.
酶切体系是：
（1）DNA 1.5 ul(约500ng)
HpaⅡ(MBI) 0.8 ul
EcoRⅠ(MBI) 0.4 ul
10*Buffer 2.5 ul
灭菌超纯水 19.8 ul
25 ul
于373-4h.
（2）DNA 1.5 ul(约500ng)
MspⅠ(MBI) 0.5 ul
EcoRⅠ(MBI) 0.4 ul
10*Buffer 2.5 ul
灭菌超纯水 20.23 ul
25 ul
于37℃放置3-4h.
哪里出了问题,导致酶切电泳没有条带.
全基因组DNA双酶切,没有弥散条带或者条带异常全基因组DNA双酶切（HpaⅡ和EcoRⅠ、MspⅠ和EcoRⅠ,110V琼脂糖电泳没有弥散条带,加大DNA的量酶切后,条带异常和从前不同.酶切产物连接完,做PCR扩增
你的实验目的和详细步骤没说清楚.我先就现有的描述分析一下：
很有可能是DNA酶或者是连接酶这2步出了问题.首先,你的第一步酶切结果和预期的不一样,你就要怀疑是否酶出了问题.测试一下也很简单,找有酶切位点的质粒来试一下就知道了.看一下缓冲液是否用对了.条件是否正确.这一步的可能性最大.这些酶是你专用的还是公共试剂,公共试剂失活的可能性就更大了.
PCR做不出来,你的引物设计位点在哪里?是否是要连接后才能出结果,那除了酶切没有完成外,DNA连接酶出错也是有可能的.
推荐你到丁香园去咨询那儿的老师。