为什么PCR跑不出来,都弥散了
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/08/27 01:59:06
为什么PCR跑不出来,都弥散了
为什么PCR跑不出来,都弥散了
为什么PCR跑不出来,都弥散了
“从头拖到尾,另外一对引物就能做出来”
说明不是引物之间形成二聚体,而是第一对引物的设计有问题(特异性很差).如果一定要扩增那个区,建议引物的位置向两边放一放.如果你没有好的设计软件,建议到Primer3去试试(目前最好的免费引物设计).
如果还是不行,把序列发给我,我帮你设计(我有专业软件,ABI primer express 3 和 Invitrogen Vector NTI 10)
PCR的产物跑琼脂糖凝胶电泳时,所有样都不出现条带,而是弥散状的,从投拖“从头拖到尾,另外一对引物就能做出来”说明不是引物之间形成二聚体,而是
弥散的原因比较多:
1、PCR产物是否在扩增结束后立即进行电泳,电泳液是否是新鲜的,如果不是很可能导致扩增产物降解。
2、PCR体系没摸索出来,用正交试验找出正确的PCR体系,不要单纯根据别人的试验资料去做,不要太相信文章中的数据,谁都会保护自己的试验结果和数据的。
3、扩增所用的引物设计的不好,找别人帮你看看,或者找生物公司帮你设计。如果是通用引物也要确定你所要扩增的基本...
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弥散的原因比较多:
1、PCR产物是否在扩增结束后立即进行电泳,电泳液是否是新鲜的,如果不是很可能导致扩增产物降解。
2、PCR体系没摸索出来,用正交试验找出正确的PCR体系,不要单纯根据别人的试验资料去做,不要太相信文章中的数据,谁都会保护自己的试验结果和数据的。
3、扩增所用的引物设计的不好,找别人帮你看看,或者找生物公司帮你设计。如果是通用引物也要确定你所要扩增的基本是高度保守的。
4、模板的问题,你用的模板是否降解了。是DNA做模板,还是RNA做模板。
最后,如果你扩增初的是多条带那就可能是引物特异性不强或者退火温度太低。如果你在摸索完条件后还是出现完全是弥散的现象建议最好换引物。
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