作业帮SephadexLH-20为什么在洗脱黄酮类物质的时候,分子量大的先洗脱下来?洗脱其他物质也是这样吗
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/08 03:06:01
SephadexLH-20为什么在洗脱黄酮类物质的时候,分子量大的先洗脱下来?洗脱其他物质也是这样吗
SephadexLH-20为什么在洗脱黄酮类物质的时候,分子量大的先洗脱下来?洗脱其他物质也是这样吗
SephadexLH-20为什么在洗脱黄酮类物质的时候,分子量大的先洗脱下来?洗脱其他物质也是这样吗
主要考虑极性和分子量谁占优势
极性起主导作用时,不一定是分量大的先洗下来
分子筛原理。固定相是带小孔的球球，小分子的容易进入，就能停留，大分子的进不去，先被洗脱下来。谢谢，我现在明白了，SephadexLH-20在洗脱黄酮类的物质的时候，并不是分子筛性质起主导作用，吸附程度是取决于游离酚羟基的数目，数目多的吸附力大，后下来，少的先下来，而其他物质的时候多少分子筛的性质起主导作用...
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分子筛原理。固定相是带小孔的球球，小分子的容易进入，就能停留，大分子的进不去，先被洗脱下来。
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Sephadex LH-20目录
Sephadex LH20简介
Sephadex LH20 的原理
Sephadex LH20 洗脱溶剂
样品的处理和洗脱溶剂的选择
分离的技巧
编辑本段Sephadex LH20简介
Sephadex LH20是一种价钱较高的填料，特点： ...
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Sephadex LH20简介
Sephadex LH20 的原理
Sephadex LH20 洗脱溶剂
样品的处理和洗脱溶剂的选择
分离的技巧
编辑本段Sephadex LH20简介
Sephadex LH20是一种价钱较高的填料，特点： 1、适合用有机溶剂分离嗜脂性分子，可以非常经济地大规模制备各种天然产物 2、结合凝胶过滤、分配色谱及吸附性层析于一身，分离结构非常相近的分子 3、载量可高达300mg样品/ml凝胶，极少需要再生，分离效果可保持十几年不变。
编辑本段Sephadex LH20 的原理
Sephadex LH20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。如果使用反相溶剂洗脱， Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。
编辑本段Sephadex LH20 洗脱溶剂
Sephadex LH20 洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。
编辑本段样品的处理和洗脱溶剂的选择
如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得将Sephadex LH20 的柱头部分弃去，很心痛呀）。如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。
编辑本段分离的技巧
（1） 流速不可太快，切切不可新急，所谓欲速则不达。 （2）柱子尽可能长， Sephadex LH20 柱长的增加将极大地改善分离，所不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力，打击敌人。 （3） 馏分一定要接的细，可1／10，或1／20 个保留体积接成一馏分。 （4） 洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保留体积。 （5）鞣质成分死吸附严重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣质 （6）Sephadex LH20 对黄酮类成分的分离效果极佳，方法很成型，有大量文献参考。 （7）填料反复使用，每次用完，一般可用甲醇将柱子洗干净，然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来，待用。
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