丽春红配方

篇一：丽春红染色液的配制及使用

丽春红（Ponceau S）染色液的配制及使用 Molecular Formula: C22H12N4Na4O13S4

Molecular Weight:：760.6

CAS Number: 6226-79-5

λ: 520 nm （water）

丽春红（Ponceau S）也称猩红，可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜（nitrocellulose membrane）和醋酸纤维素膜（cellulose acetate membrane）上的蛋白的检测。丽春红带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。丽春红染色的灵敏度不及考马斯亮蓝染色。

丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或其它适当溶液洗去。因此，蛋白质N端测序时将SDS-PAGE胶上的蛋白转移到PVDF膜，用丽春红染色后将目的条带切下用于测序。

注意：丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。

使用说明

将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中，摇动5-10分钟或更长时间；取出印迹膜，用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，可出现清晰条带，记录结果；用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，每次3-5分钟，去除丽春红，进行后续的WB检测。

补充：丽春红染色液也可以直接用来染PAGE胶，不过，在染色之前最好用甲醇-乙酸溶液浸泡一下PAGE胶，起到固定蛋白的作用。

丽春红染色液的配制

常用的丽春红染色液有两种：一种用乙酸配制，另外一种用三氯乙酸（TVA）和5-磺基水杨酸（5-Sulfosalicylic acid）配制。配制方法如下：

一、用乙酸配制成分：0.1%（w/v）丽春红，5%（v/v）乙酸，ddH2O。

4 ℃保存，不要冻上。也可以配成“0.2%（w/v）丽春红，3%（v/v）乙酸，ddH2O”。

二、用三氯乙酸和5-磺基水杨酸成分：2%

杨酸。

w/v）丽春红，30%的三氯乙酸，30%的5-磺基水（

篇二：Westblotting 试剂配制

一、试剂配制：

1. 2×SDS凝胶加样缓冲液： 100 mmol/L Tris·HCl(6.8) 200 mmol/L二硫苏糖醇（DTT） 4% SDS（电泳级） 0.2% 溴酚蓝 20% 甘油

不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取

1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。

2. 30%丙烯酰胺溶液

将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为80ml的水

中。搅拌溶解，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器（0.45μm孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于4℃。

3. 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）

在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水，分成小份贮存于-20℃。

4. 1.5mol/L Tris·HCl（pH8.8）

Tris (MW121.14) 45.43g 超纯水 200ml溶解后，用浓盐酸调pH至8.8，最后用超纯水定容至250ml，室温下保存。

5. 1 mol/L Tris·HCl（pH6.8）

Tris (MW121.14) 30.28 g 超纯水 200ml 溶解后，用浓盐酸调pH至6.8，最后用超纯水定容至250ml，室温下保存。

6. 电泳缓冲液

Tris（MW121.14） 3.03 g 甘氨酸（MW75.07） 18.77g SDS 1g

蒸馏水至 1000 ml

7. 转移缓冲液：

甘氨酸（MW75.07） 2.9 g Tris（MW121.14） 5.8 g SDS 0.1 g

甲醇 200ml （最后加入） 蒸馏水至 1000 ml

8. 细胞裂解液：临用前加入蛋白酶抑制剂PMSF。

Triton-100 1%

TrisHCl (pH 8.0) 50mmol/L NaCl 150mmol/L

9 蛋白酶抑制剂：PMSF 100mM/L（剧毒物品）

称量0.174g PMSF(针状结晶固体)溶于10ml 异丙醇,震荡混匀，保存４℃. 10 TBST: 4℃ 保存

100 mMol/L Tris.cl pH 8.0 0.9%(m/V) NaCl 0.05% (V/V)Tween-20

二、细胞裂解液制备操作规程： 1. 收集107细胞，PBS洗涤两次。

2. 细胞沉淀中加入4℃预冷细胞裂解液200 μl,加PMSF到终浓度为1mM/L。 3. 剧烈震荡使细胞充分悬浮混匀。 4. 4℃放置15~30 min，期间混匀几次。

5. 4℃离心，10000 g, 10 min， 取上清备用。存放于-70 ℃。

WB实验步骤：

1. 分离胶的配制：配制12%分离胶（参照配方）。灌胶至玻璃板2/3处，预留浓

缩胶的位置。加蒸馏水封闭，凝胶30分钟。水和凝胶界面可见一条折线。 2. 洗涤：弃去上层蒸馏水，洗涤分离胶上层界面。滤纸吸干残留水分。 3. 浓缩胶的配制：配制5%胶浓缩胶（参照配方）。灌胶，插入合适的梳子，凝

胶30分钟。

4. 样品制备：取合适的蛋白量与2倍体积上样缓冲液等比混匀，100℃煮沸5分

钟。

5. 加样：每个泳道加入10-20ul的上述样品（胶一般在1mm 到1.5 mm）。 6. 电泳：等压电泳（浓缩胶 70V ；分离胶 150V）。至溴酚兰刚跑出即可终止。 7. 平衡：将电泳后的凝胶取出，在转移缓冲液中浸泡平衡15分钟以上。PVDF

膜先在甲醇中浸泡10-15秒，再在纯水中浸泡2min，然后同样在转移缓冲液中浸泡平衡15分钟。

8. 按顺序依次放置：（-）海绵垫-滤纸（双层）-凝胶-PVDF膜-滤纸-海绵垫（+）；

并且用玻璃棒仔细去除气泡。PVDF膜的一侧靠近正极，要保持膜是湿润的。 9. 湿转：恒流电泳100 mA。时间大约60~100 min，根据预染Marker的条带进行

调整。

10. 洗涤：将PVDF膜取下，用蒸馏水洗涤 2 遍，每次2 min。 11. 封闭：含5%脱脂牛奶的TBST液，过夜。 12. 洗涤：TBST洗涤三遍。每次10分钟。

13. 加入一抗：加入含5%脱脂奶粉TBST稀释过的抗体。 14. 洗涤：TBST洗涤三遍。每次10分钟。

15. 加入 HRP-二抗：用含5%脱脂奶粉TBST稀释到合适的比例 16. 洗涤：TBST洗涤三遍。每次10分钟。

17. 加入ECL底物：1.8~2 ml/膜。 室温2~5分钟。 18. 暗室暴光： 30s~3 min 。（30s 60s 90s 120s） 19. 胶片 依次放到显影液和定影液中浸泡2~5 min。 附件1：不同浓度凝胶的分离范围（C＝29：1）

pvdf膜到底能不能用丽春红染色来查看蛋白是否转上去 ？

我转过很多次了，都没有看到过丽春红显色。但是有看到有人说能染上，是在是不知道，请教给位大大了

可以显色，但是一会就消失了，与蛋白结合是可逆的。 可以染色。

详情请搜索本版，有过类似讨论。

可以染上色，将膜放入丽春红中浸一下就可以染上色了，如果浸的时间过长，就是一片红，看不见条带，可以用水洗一下。

【1】PVDF膜肯定可以用丽春红染色的。我们这里的很多人基本上用 的都是PVDF膜，染膜用的都是丽春红。大多数时候都能染出条带的。

【2】下面是丽春红的配方：

10X丽春红染液 丽春红S 2g 三氯乙酸 30g 磺基水杨酸 30g 蒸馏水至 100ml

使用时将其稀释10倍。

当然现在有很多公司直接卖配好的丽春红，因为其可以回收重复利用，所以可以买配好的丽春红。下面是一份丽春红的说明书：

1.将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中，摇动3-5分钟或更长时间，直至出现清晰条带。对结果作适当 记录。

2.用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，每次3-5分钟，去除丽春红，进行后续的Western检测。

从使用说明中，我们可以看出，PVDF膜是可以用丽春红染色的。

【3】 我的染色方法是：转膜完成后，取出膜在甲醇里泡1分钟，然后在双蒸水中过一下，放入丽春红里染色，室温，摇床上，时间是5－30分钟。然后把染好的膜放到 双蒸水中洗一下，不要洗的太久，把表面的丽春红洗掉就可以了。这时就可以看到红色的蛋白条带了。然后把膜放在TBST中，室温，摇床上洗3次，每次10分 钟。然后就可以往下做了。

【4】丽春红的染色敏感性和ECL敏感性差的很远呢。也就是说，及时丽春红染色染不出来，ECL 也有可能曝光曝出来的。

【5】感觉丽春红染色效果不是很好的，有时候清楚，有时候也不是很清楚。而且染色后再往下做后面的结果会收到一定的影响。所以，如果熟练了，后面就可以不染色了。也可以上样的时候都上两个孔的样，转膜后把这两个孔对应的膜剪下来染色，如果染上了，说明其他的也会染上的。

篇三：溶液配制

苏木精配制

6.0g 苏木精，0.6g 碘酸钠，52.8g 硫酸铝，690ml 蒸馏水，250ml 乙二酸乙二醇，60ml冰乙酸

尹红染液：0.5-1.0g，蒸馏水99ml

0.5g尹红，100ml 95%乙醇，2滴冰乙酸 50×TAE Buffer 配制方法：

1. 称量Tris 242g，Na2EDTA.2H2O 37.2g 于1L烧杯中；

2.向烧杯中加入约800ml去离子水，充分搅拌均匀； 3加入57.1ml的冰乙酸，充分溶解；

4.加去离子水定容至1L后，室温保存。

裂解液配制（500ml）

成分 终浓度 用量

脲（变性剂） 4M 120.12g

EDTA.2Na H2O 10mM 1.8614g

Sodium Lauroyl Sarcosine 5g/L 2.5g

Nacl 0.2M 5.844g

Tris-Hcl（1M,PH=8.0） 1:10----0.1M 50mM

ddH2O 补足至500Ml

0.5%甲基绿配制（100ml）

0.5g甲基绿，0.1M 乙酸钠 100ml，，，称取1.3608g三水合乙酸钠加入到混合物中，加ddH2O定容至100ml 染8-10min

室温避光保存

1g甲基绿，1ml冰乙酸，99ml单蒸水室温避光保存。染10min

X-gal 染色Buffer配制（100ml的量）

20mmol 0.845g

20mmol 0.658g

2mM Mgcl2 0.19g*（95+18*6）/95=0.0406g Mgcl2.6H2O

用PBS（ph=7.4）定容至100ml

Bradford法测定蛋白浓度的方法——bradford assay protocol 原理：考马斯亮蓝G250在一定浓度的乙醇和酸性条件下，可配成淡红的溶液。当与蛋白质结合后，产生蓝色化合物。反应化合物在465-595nm处有最大光吸收值。化合物深浅与蛋白浓度的高低成正比例关系。故可以检测595nm的光吸收值来计算蛋白含量。 Bradford显色液的配制

（1） bradford储存液：100ml95%乙醇，200ml88%磷酸，350mg

考马斯亮蓝G250，室温下长期稳定。

（2） bradford工作液：425ml双蒸水，15ml95%乙醇，30ml88%磷

酸，30mlbradford储存液；waterman 1号滤纸过滤，保存于室温棕色瓶内，使用前需再过滤。

实验材料

BSA 1mg/ml，待测蛋白，待测蛋白所用缓冲液，96孔板，酶标仪 BSA标准样品的配制

样品编号 BSA(ul) buffer（ul）

1 0 30

2 5 25

3 10 20

4 15 15

5 20 10

6 25 5

7 30 0

待测样品的准备

待测样品预先用OD280粗测浓度，大致确认浓度后，进行稀释和BSA样品2号，7号在bradford显色液中显色的深浅进行目测比较，确定比较适合的稀释比例。然后制备不同浓度待测蛋白样品2-3个，每个样品10ul，待用。

测定方法

取96孔酶标板，向孔内加入140ul的bradford显色液，再加入蛋白样品3ul，混合均匀。每个BSA及待测蛋白样品需重复2-3个。然后选取酶标仪595nm波长进行扫描读数。

实验结果用EXCEL进行平均，做出BSA的标准曲线，根据线性方程和稀释后待测蛋白样品的读数，计算出待测蛋白的浓度。 Western blot 用TBS 配方（1×）

20mM Tris-base Hcl 150mM Nacl

2.4228g 8.776g

加ddH2O定容至1L，调PH至7.5，再配成0.05%Tween，即1L 加0.5ml Tween-20=500ul

电泳缓冲液（1L）：Tris-base 3.03g

甘氨酸 14.4g

SDS 1g 加ddH2O定容至1000ml 转膜缓冲液（1L）：Tris-base 3.03g

甘氨酸 14.4g

甲醇 200ml

加ddH2O定容至1000ml

丽春红染液（5×）：称取丽春红2.5 g，冰醋酸5 mL，加去离子水至100 mL，溶解。

试剂

超纯水 10%分离胶10%分离胶/ 12%分离胶 2.2 ml 1.9 mL 1.6ml 2.1ml 浓缩胶 1.8

1.9ml

30%丙烯酰胺(40%40%) 1.2 ml 1.7 mL 2.0ml 1.5ml 0.4

0.3ml

Ttis-HCl(pH8.8)

Ttis-HCl(pH6.8)

10%SDS

10%AP(过硫酸铵)

TMEMD 1.3 mL —— 50 μL 50 μL 2.5 μL —— 0.8 mL 30 μL 30 μL 2 μL mL mL

10%BSA（封闭液）：10 g BSA，用100 mL TBST溶解，分装于EP管中，-20 ℃保存。2.0-2.5%BSA(使用浓度) 尿素裂解缓冲液(20mL)：提蛋白用

1M DTT 2mL

8M尿素 15.62 mLX8X0.001X60=7.4976g 4M NaCl 125 μLX4X58.4X0.001=29.2g 1M Hepes 400 μL

10% Triton100 100 μL

用去离子水定容至20 mL，4℃保存（用前加蛋白酶抑制剂PMSF和Protease inhibit cocktail）。

5×SDS-PAGE Loading Buffer：(WESTERN BLOT 用)

SDS 0.5 g

1M Tris-HCl（PH6.8） 1.25 mL

甘油 2.5 mL

溴酚蓝（BPB） 0.025 g

一、用乙酸配制成分：0.1%（w/v）丽春红，5%（v/v）乙酸，ddH2O。

甲基绿一派洛宁染色

A．2 g甲基绿加0.2mol／L醋酸缓冲液至100ml； B．1.0g派洛宁Y(派洛宁Y/派洛宁G/焦宁Y/吡罗红Y)加醋酸缓冲液至100ml；临用时：甲液与乙液5：2混合即成。

0.2mol／L醋酸缓冲液配制: 0.2mol／L醋酸缓冲液(pH4.8)：1．冰醋酸1.2ml加蒸馏水至100ml。2．醋酸钠(NaAc·3H20)2.72g溶于100ml

A,B各配50ml，即称取甲基绿1g，派洛宁Y 0.5g分别加入50ml醋酸缓冲液中，待用。

即取70ml0.2mol／L醋酸缓冲液 相当于 50mlA液加20mlB液0.2mol／L醋酸缓冲液 称取甲基绿2X50/100=1 g

派洛宁Y 1.0X20/100=0.2g

若配成100ml，即各染料的质量分别变为甲基绿 1X10/7=1.4286g

派洛宁 0.2X10/7=0.2857g

染5min左右，用蒸馏水洗2-3次，每次数秒钟，丙酮脱水，二甲苯透明封片。

A,B

篇四：丽春红(PONCEAU S)染色液的配制及使用

丽春红（Ponceau S）染色液的配制及使用

丽春红（Ponceau S）也称猩红，可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜（nitrocellulose membrane）和醋酸纤维素膜（cellulose acetate membrane）上的蛋白的检测。丽春红带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。丽春红染色的灵敏度不及考马斯亮蓝染色。

丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或其它适当溶液洗去。因此，蛋白质N端测序时将SDS-PAGE胶上的蛋白转移到PVDF膜，用丽春红染色后将目的条带切下用于测序。

注意：丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。

使用说明

将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中，摇动5-10分钟或更长时间；取出印迹膜，用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，可出现清晰条带，记录结果；用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，每次3-5分钟，去除丽春红，进行后续的WB检测。

补充：丽春红染色液也可以直接用来染PAGE胶，不过，在染色之前最好用甲醇-乙酸溶液浸泡一下PAGE胶，起到固定蛋白的作用。

丽春红染色液的配制

常用的丽春红染色液有两种：一种用乙酸配制，另外一种用三氯乙酸（TVA）和5-磺基水杨酸（5-Sulfosalicylic acid）配制。配制方法如下：

一、用乙酸配制成分：0.1%（w/v）丽春红，5%（v/v）乙酸，ddH2O。

4 ℃保存，不要冻上。也可以配成“0.2%（w/v）丽春红，3%（v/v）乙酸，ddH2O”。

篇五：分子克隆上的标准配方

分子克隆上的标准配方

1. PBS：10×，1000 ml

137 mmol/L NaCl MW：58.44 80 g

2.7 mmol/L KCl MW：74.55 2 g

10 mol/L Na2HPO4·12H2O MW：358.14 36 g

2 mmol/L KH2PO4 MW：136.09 2.4 g

10×储存液：1000 ml ddH2O溶解80 g NaCl，2 g KCl，36 g Na2HPO4·12H2O，2.4 g KH2PO4，室温保存。

1× 工作液：使用时取出100 ml 10× PBS，加ddH2O至800 ml，HCl调节pH至7.4，加入ddH2O定容至1000 ml。

PBS: 1.16 g Na2HPO4, 0.1 g KCl, 0.1 g K3PO4, 4 g NaCl (500 ml distilled water) pH 7.4.

2. Running Buffer：10×，1000 ml

25 mmol/L Tris MW：121.14 30.3 g

250 mmol/L Glycine MW：75.07 187.7 g

0.1%（m/V）SDS 10 g

10×储存液：900 ml ddH2O加入30.3 g Tris，187.7 g Glycine，10 g SDS，60°C加热搅拌促进溶解，定容到1000ml，室温保存。

1× 工作液：使用时取出100 ml 10× Running Buffer，加入ddH2O至1000 ml。

注意回收利用。

3. Transfer Buffer：10×，1000 ml

24 mmol/L Tris MW：121.14 29.1 g

192 mmol/L Glycine MW：75.07 144 g

20% methanol

10×储存液：1000ml ddH2O溶解29.1 g Tris，144 g Glycine，室温保存。

1× 工作液：使用前取出100 ml 10× Transfer Buffer，加入200 ml methanol（若蛋白分子量较大如超过100kDa，加入100 ml methanol即可），加入ddH2O定容至1000 ml，4°C预冷。

注意回收利用。

4. TBS：10×，1000 ml

137 mmol/L NaCl MW：58.44 80 g

2.7 mmol/L KCl MW：74.55 2 g

25 mmol/L Tris MW：121.14 30 g

10×储存液：1000 ml ddH2O溶解80 g NaCl，2 g KCl，30 g Tris，室温保存。

1× 工作液：使用之前取出100 ml TBS，加入ddH2O定容至1000 ml，加入1 ml Tween-20混匀。pH调至7.4。

5．1.5mol/L Tris·HCl（pH8.8）

Tris (MW121.14) 45.43g

超纯水 200ml

溶解后，用浓盐酸调pH至8.8，最后用超纯水定容至250ml，高温高压灭菌或过滤，室温下保存。 注；应使溶液冷却至室温后在调定PH，因为Tris溶液的PH值随温度变化差异很大。

6．0.5mol/L Tris·HCl（pH6.8）

Tris (MW121.14) 15.14g

超纯水 200ml

溶解后，用浓盐酸调pH至6.8，最后用超纯水定容至250ml，室温下保存。

7．1.0mol/L Tris·HCl

Tris (MW121.14) 30.29g

蒸馏水 200ml

pH至所需点，最后用蒸馏水定容至250ml，高温灭菌后室温保存。

8．1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF

PMSF 0.174g

异丙醇 100ml

溶解后，分装于1.5ml离心管中，-20℃保存。

9． 0.2mol/L NaH2PO4

NaH2PO4（MW119.98） 12g

蒸馏水至 500ml

溶解后，高压灭菌，室温保存。

10．0.2mol/LNa2HPO4

Na2HPO·12H2O（MW 358.14） 71.6g

蒸馏水至 1000ml

溶解后，高压灭菌，室温保存。

11．10％SDS

SDS 10g

蒸馏水至 100ml

50℃水浴下溶解，室温保存。如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。

12．10％过硫酸胺（AP）

过硫酸胺 0.1g

超纯水 1.0ml

溶解后，4℃保存，保存时间为1周。

（可先将过硫酸胺干粉称好分量后放在EP管中，一次性多装几管，使用时加入超纯水即可）

13．40％Acr/Bic（37.5：1）

丙稀酰胺（Acr） 37.5g

甲叉双丙稀酰胺（Bic） 1g

超纯水至 100ml

溶解后4℃保存。使用时恢复至室温且无沉淀。

14．20％Tween20

Tween20 20ml

蒸馏水至 100ml

混匀后4℃保存。

15．单去污剂裂解液（含有PMSF）

1mol/L Tris·HCl（pH8.0） 2.5ml

NaCl 0.438g

TritonX-100 0.5ml

蒸馏水至 50ml

混匀后4℃保存。使用时，加入PMSF至终浓度为100μg/ml（0.87ml裂解液加入

1.74mg/ml PMSF50μl）。

实际用的比较多的其实是RIPA裂解配方：

0.5M Tris-HCl (pH 8.0) 10ml

150 mM NaCl 10ml

1 mM EDTA 可省略

1% NP40 1ml

1% 脱氧胆酸钠 0.5g

10% SDS 1ml

ddH2O 78ml

4°冰箱保存，临用前90ul 加入1 mM PMSF 1ul+10ul cocktail

RIPA buffer (Radio Immuno Precipitation Assay buffer)

150 mM sodium chloride

1.0% NP-40 or Triton X-100

0.5% sodium deoxycholate

0.1% SDS (sodium dodecyl sulphate)

50 mM Tris, pH 8.0

注：The 10% sodium deoxycholate stock solution (5 g into 50 ml) must be protected from light.

16． TBST缓冲液

20％Tween-20 1.65ml

TBS 700ml

混匀后即可使用，最好现用现配。

17．G250考马斯亮蓝溶液（蛋白定量专用）

考马斯亮蓝G250 100mg

95％乙醇 50ml

磷酸 100ml

蒸馏水至 1000ml

配制时，先用乙醇溶解考马斯亮蓝染料，再加入磷酸和水混匀，用滤纸过滤，4℃保存。

18．0.15 mol/L NaCl

NaCl（MW58.44） 0.877g

蒸馏水至 100 ml

高温灭菌后，室温保存。

19．100mg/ml 牛血清白蛋白（BSA）

BSA 0.1g

0.15 mol/L NaCl 1ml

溶解后-20℃保存。制作蛋白标准曲线时，用0.15 mol/L NaCl进行100倍稀释成1mg/ml，-20℃保存。

用于抗体稀释时，WB用1*TBST，IF用PBS。

20．还原型5XSDS上样缓冲液

0.5 mol/L Tris·HCl（pH6.8） 2.5ml

二硫叔糖醇（DTT，MW154.5） 0.39g

SDS 0.5g

溴酚蓝 0.025

甘油 2.5ml

混匀后，分装于1.5ml离心管中，4℃保存

21．10X丽春红染液 丽春红S 2g

三氯乙酸 30g

磺基水杨酸 30g

蒸馏水至 100ml

使用时将其稀释10倍。

22．TBS缓冲液

1 mol/L Tris·HCl（pH7.5） 10ml

NaCl 8.8g

蒸馏水至 1000ml

（可以配制成10×TBS缓冲液进行保存，稀释10倍使用）

10×TBS：1000ml

137mmol/L NaCl MW；58.44 80g

2.7mmol/L KCl MW；74.55 2g

25mmol/L Tris MW；121.14 30g

10×储存液：1000 ml ddH2O溶解80 g NaCl，2 g KCl，2gKCL，30g Tris，室温保存。 1× 工作液：使用时取出100 ml 10× TBS，加ddH2O至1000 ml，加入1mlTween-20 1ml，

l调节pH至7.4。

TBS 10x (concentrated TBS)

24.23 g Trizma HCl

80.06 g NaCl

Mix in 800 ml ultra pure water.

pH to 7.6 with pure HCl.

Top up to 1 L.

TBST

For 1 L: 100 ml of TBS 10x + 900 ml ultra pure water + 1ml Tween20

23． 封闭液

脱脂奶粉（国产，光明牌） 5 g

TBST 100ml

最好现用现配。

24．洗脱抗体缓冲液

14.4 mol/L 2- Mercaptoethanol(β-巯基乙醇) 700 μl（通风厨里加）

SDS 2g

0.5mol/L Tris·HCl（pH6.8） 12.5ml

超纯水至 100ml

配制时，在通风厨内进行。4℃保存。可重复使用1次。

（可用可不用）

25．显影液（5X）

自来水（加热至50℃） 375ml （以下药品加到温水中）

米吐尔 1.55g

亚硫酸钠（无水） 22.5g

碳酸钠（无水） 33.75g

溴化钾 20.95g

补水至 500ml

配制时，上述药品应逐一加入，待一种试剂溶解后，再加入后一种试剂。4℃保存。使用时用自来水稀释至1倍。

26．定影液

自来水（50～60℃） 700ml （以下药品按顺序加入前者溶解后再加后者）

硫代硫酸钠 240g

亚硫酸钠（无水） 15g

冰乙酸 12.6ml

硼酸 7.5g

钾明矾 15g（水温冷至30℃以下时再加入）

加水定容至1000ml，室温保存。

27. Nonidet-P40 (NP40) buffer

150 mM sodium chloride

1.0% NP-40 (或Triton X-100 )

50 mM Tris, pH 8.0

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