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篇一：SANTA CRUZ免疫沉淀流程

2:

免疫沉淀

? 培养细胞（100 毫米细胞培养皿上达到80-90% 汇合度，或者细胞培养瓶中达到大约2-5 x 107 个悬浮细胞）。

? 单层细胞培养瓶中加 3 ml 冰冷 RIPA 缓冲液，4o C 孵育 10 分钟。如果是悬浮细胞，RIPA 缓冲液加到盛有漂洗过的细胞沉淀中。

? 破碎细胞用反复通过 21 号针头。然后移至15ml离心管。

? 可用 1 ml 冰冷缓冲液清洗细胞培养瓶，并入第一次裂解液。

? 4o C 下 10,000xg 离心 10 分钟沉淀细胞碎片。将上清液移至一个新的15ml离心管并置于冰上。

? 加入 1.0 μg 相应对照 IgG（与一抗的来源种属相一致），同时加入 20 μl 重悬浮的琼脂糖结合蛋白（蛋白A－琼脂糖，蛋白G－琼脂糖，蛋白A/G－琼脂糖，蛋白L－琼脂糖）预吸附细胞裂解液。4o C 孵育 30 分钟。

? 4o C 下，2,500 rpm（例如：Eppendorf 5415D；约1,000xg）离心 5min。 ? 将1ml上清液或约 100–500 μg 总细胞蛋白转移到一个1.5ml微离心管。加入 1–10 μl（或0.2–2 μg）一抗（最佳的抗体浓度应通过滴定获得）并在 4o C 下孵育 1

小时。替代方法：也可用琼脂糖偶联的抗体，加 20 μl（相当于5微升球珠）4o C 温育 1 小时至过夜，同时平缓摇动；跳过下一步操作。

? 加入20ul 的琼脂糖偶联悬浮液（Protein A-Agarose，Protein G-Agarose，Protein A/G-Agarose，或Protein L-Agarose）。加盖后置于摇床，4℃下孵育1小时至过夜。

? 4o C 下离心，2,500 rpm（约1,000xg）5min。收集免疫沉淀物。小心弃去上清。

? 用 1 ml RIPA（较强烈）或 PBS（稍温和）缓冲液轻轻洗涤沉淀4次。每次都重复离心步骤。

? 洗涤结束后，小心移去上清液并用 40 μl 1x 电泳上样缓冲液重悬浮沉淀。 ? 样品煮沸 2–3 分钟。SDS-PAGE电泳分析20μl并自显影。多余样品可放－20o

C 保存。

可选步骤：也可煮浮后离心，去掉琼脂糖球珠，然后用上清液做 SDS-PAGE 分

析。

篇二：科英布拉圣克鲁斯酒店(Santa Cruz)

科英布拉圣克鲁斯酒店(Santa Cruz)

舒适度作为科英布拉圣克鲁斯酒店所有的客房首要标准，一切设施都以此为目标，一定不会让您失望。酒店客房简单温馨，配有闹钟，电风扇，卫星频道/有线电视，电视，房内保险箱，洗漱用品，共用卫浴间等设施，清新自然却又处处透露着酒店的用心。 中文名称 英文名称 酒店地址

科英布拉圣克鲁斯酒店 Santa Cruz

Praca 8 de Maio, no 21, 3o andar, 哥印布拉, 葡萄牙

【好巧网解读】4大卖点

1.

2. 酒店位置非常优越，处于中心地带，购物吃饭非常方便，闹中取静 3. 位置很好，外出就餐和购物玩耍都很方便

4. 酒店的位置很好，附近吃喝玩乐应有尽有，很方便

酒店的图片

酒店房型房价介绍

每个客房都配有闹钟，电风扇，卫星频道/有线电视，电视，房内保险箱，洗漱用品，共用卫浴间，希望能让客户在入住时更加愉快惬意。酒店的房型有多种选择，提供了双人床或双床房-公用浴室、双人床房或双床房、客房，房间布置都到位，服务员也很热情。简而言之，客人在科英布拉圣克鲁斯酒店享受的服务与设施会有宾至如归的感觉。 再讲究的客人也能在酒店得到满意的服务。

相关条款

儿童及加床:加床政策根据您所选定的客房而有所不同，更多详情请查看您所选定的客房的政策。

好巧网酒店评价分

比较好，70分

酒店优缺点

游客提到的优点：有接待儿童 有周边餐厅 有便利店 有周边生活

备注：

好巧网综合打分是基于100多个酒店预订网站的评分综合算出。以上是该酒店在几家酒店预订网站上的评分，供您参考。 好巧网对酒店特色的分析数据，来自主流的酒店预订网站、旅游社区网站提到该酒店的评论，尽量展示客观中立的分析。

查询更多用户评论信息，请访问http://www.haoqiao.cn/Coimbra_c441/110754.html

篇三：2015USNews全球大学排名

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10月28日，US News联合汤森路透，发布了2015年全球大学的排名。

在全球前百名大学的名单中，美国大学依旧有50所入选，占据了半壁江山。高居榜首的是老牌名校哈佛大学，麻省理工学院位居次席，西海岸的斯坦福大学排名第4。因为排名方法的改变，全美综合大学排名第一的普林斯顿大学跌到了13名，类似的这种以本科精英教育为核心的大学排名都受到了影响。而美国的公立大学则在这一USNEWS全球排名中上演了大跃进的好戏，UC-Berkeley和UCLA分列第3和第8位，位于西雅图的华盛顿大学也升至第14位的惊人高度。

【US News Top World University Rankings】

排名 学校 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 14 14 17 18 19

Harvard University Massachusetts Institute of Technology Stanford University University of Oxford University of Cambridge

国家 美国 美国

University of California--Berkeley 美国

美国 英国 英国

California Institute of Technology 美国 美国 University of California--Los Angeles University of Chicago Columbia University Johns Hopkins University Imperial College London Princeton University University of Michigan University of Toronto University of Washington Yale University

University of Pennsylvania

美国 美国 美国 英国 美国 美国 加拿大 美国 美国 美国

University of California--San Diego 美国

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20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 30 32 32 34 35 36 37 37 39 40 41 42 42 44

Duke University

University College London University of California--San Francisco Cornell University University of Tokyo Northwestern University Swiss Federal Institute of Technology Zurich

University of California--Santa Barbara

University of British Columbia University of Texas--Austin University of Melbourne

美国 英国 美国 美国 日本 美国 瑞士

University of Wisconsin--Madison 美国

美国

美国 University of Minnesota--Twin Cities

加拿大 美国 澳大利亚

University of North Carolina--Chapel

美国

Hill

Ohio State University University of

Illinois--Urbana-Champaign New York University Boston University

University of California--Davis Peking University University of Edinburgh University of Hong Kong University of Pittsburgh McGill University

美国 美国 美国 美国 美国 中国 英国 香港 美国 加拿大

Washington University in St. Louis 美国

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45 46 47 48 49 50 51 52 53 53 55 55 55 58 59 60 61 61 63 64 65 66 67 68 69 69 71

University of Sydney

Pierre and Marie Curie University - Paris 6

University of Munich University of Manchester University of Southern California University of Maryland--College Park

Pennsylvania State University KU Leuven

University of Florida Karolinska Institute

National University of Singapore Rutgers State University University of Colorado--Boulder Ruprecht Karl University of Heidelberg Kyoto University

Georgia Institute of Technology King's College London University of Arizona University of Copenhagen University of California--Irvine Tsinghua University Utrecht University Purdue University Université Paris-Sud Rockefeller University

澳大利 法国

University of Queensland Australia 澳大利亚

德国 英国 美国 美国 美国 比利时 美国 瑞典 新加坡 美国 美国 德国 日本 美国 英国 美国 丹麦 美国 中国 荷兰 美国 法国 美国

University of California--Santa Cruz 美国

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72 Australian National University 72 Seoul National University 74 Carnegie Mellon University 75 Leiden University 75 Michigan State University 77 école Polytechnique Fédérale de Lausanne

77 Humboldt University of Berlin 77 Universidade de S?o Paulo 80 University of Amsterdam 81 Free University of Berlin 82 University of Bristol 83 University of Zurich 84 Emory University

84 Erasmus University Rotterdam 86 Texas A&M University--College Station

87 Ghent University 88 Monash University 89 Rice University 89 Vanderbilt University 91 London School of Hygiene & Tropical Medicine 91 Tufts University 93 University of G?ttingen 94 Technical University of Munich 94 University of New South Wales 96 University of Barcelona 96 University of Montreal 98

Lund University

澳大利亚 韩国 美国 荷兰 美国 瑞士 德国 巴西 荷兰 德国 英国 瑞士 美国 荷兰 美国 比利时 澳大利亚 美国 美国 英国 美国 德国 德国 澳大利亚 西班牙 加拿大 瑞典

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98

University of Groningen 荷兰 芬兰

100 University of Helsinki

篇四：Quotation-Santa Cruz

[

Recticel Foams

---- Quotation for Kingdee K/3

2011-01-13

DAVIDZHANG(张道波)

1 Quote in Summary

Currency: RMB

2 Quote in Detail

2.1 License for Software

2.2 Consultancy for Implementation

Implementation Policy is KINGDEE WAY, Estimated billable man.day for implementation is 15 days. Price: 3,000RMB/man.day. Cost for Implementation:

PS: This is estimated cost on consultancy. It will be charged based on the actual billable man.days.

2.3 Maintenance

以下无正文.

篇五：Santa Cruz免疫沉淀流程

2:

免疫沉淀

? 培养细胞（100 毫米细胞培养皿上达到80-90% 汇合度，或者细胞培养瓶中达到大约 2-5 x 107 个悬浮细胞）。

? 单层细胞培养瓶中加 3 ml 冰冷 RIPA 缓冲液，4o C 孵育 10 分钟。如果是悬浮细胞，RIPA 缓冲液加到盛有漂洗过的细胞沉淀中。

? 破碎细胞用反复通过 21 号针头。然后移至15ml离心管。

? 可用 1 ml 冰冷缓冲液清洗细胞培养瓶，并入第一次裂解液。

? 4o C 下 10,000xg 离心 10 分钟沉淀细胞碎片。将上清液移至一个新的15ml离心管并置于冰上。

? 加入 1.0 μg 相应对照 IgG（与一抗的来源种属相一致），同时加入 20 μl 重悬浮的琼脂糖结合蛋白（蛋白A－琼脂糖，蛋白G－琼脂糖，蛋白A/G－琼脂糖，蛋白L－琼脂糖）预吸附细胞裂解液。4o C 孵育 30 分钟。

? 4o C 下，2,500 rpm（ 例如：Eppendorf 5415D；约1,000xg）离心 5min。 ? 将1ml上清液或约 100–500 μg 总细胞蛋白转移到一个1.5ml微离心管。加入 1–10 μl（或0.2–2 μg）一抗（ 最佳的抗体浓度应通过滴定获得）并在 4o C 下孵育 1小时。替代方法：也可用琼脂糖偶联的抗体，加 20 μl（相当于5微升球珠）4o C 温育 1 小时至过夜，同时平缓摇动；跳过下一步操作。

? 加入20ul 的琼脂糖偶联悬浮液（Protein A-Agarose，Protein G-Agarose，Protein A/G-Agarose，或Protein L-Agarose）。加盖后置于摇床，4℃下孵育1小时至过夜。

? 4o C 下离心，2,500 rpm（约1,000xg）5min。收集免疫沉淀物。小心弃去上清。

? 用 1 ml RIPA（较强烈）或 PBS（稍温和）缓冲液轻轻洗涤沉淀4次。每次都重复离心步骤。

? 洗涤结束后，小心移去上清液并用 40 μl 1x 电泳上样缓冲液重悬浮沉淀。 ? 样品煮沸 2–3 分钟。SDS-PAGE电泳分析20μl并自显影。多余样品可放 －20o C 保存。

可选步骤： 也可煮浮后离心，去掉琼脂糖球珠，然后用上清液做 SDS-PAGE 分

析。

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