作业帮实时荧光定量PCR后反应体系出现蒸发,用的是ABI 7500我做实时荧光定量PCR,有两个问题要解决：1.PCR之后发现反应体系减少了,可能是因为蒸发了,但是我在PCR之前使劲盖紧盖子了,为什么还会减少.
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/06 06:41:17
实时荧光定量PCR后反应体系出现蒸发,用的是ABI 7500我做实时荧光定量PCR,有两个问题要解决：1.PCR之后发现反应体系减少了,可能是因为蒸发了,但是我在PCR之前使劲盖紧盖子了,为什么还会减少.
实时荧光定量PCR后反应体系出现蒸发,用的是ABI 7500
我做实时荧光定量PCR,有两个问题要解决：
1.PCR之后发现反应体系减少了,可能是因为蒸发了,但是我在PCR之前使劲盖紧盖子了,为什么还会减少.
2.PCR反应体系有气泡,对PCR的结果影响大吗
实时荧光定量PCR后反应体系出现蒸发,用的是ABI 7500我做实时荧光定量PCR,有两个问题要解决：1.PCR之后发现反应体系减少了,可能是因为蒸发了,但是我在PCR之前使劲盖紧盖子了,为什么还会减少.
你盖紧了盖子不等于就盖紧了PCR管.可能你用的是国产的PCR管吧.通常国产的质量稍差,本身就是密封不严的.也就是说PCR管口不够严密,盖上PCR管子的盖,也不能完全密封.这样即使你怎么使劲盖,也没有用.要解决蒸发的问题,有两个办法,一个是用进口管,可以有效的减少蒸发,但如果你体系做得太小,比如5微升,那么蒸发可能还是比较明显.另一个办法就是还用你原来的PCR管子,但是把体系加大!比如你原来做15微升,现在改到做30微升,保证即使蒸发了也能够你用!
PCR反应有气泡很可能是因为你把PCR管放入PCR仪之前没有离心!通常我们会瞬离一下,把气泡离掉!PCR反应是不可能产生气泡的,因为只是简单的加热,降温的变化,没有达到沸腾.如果有气泡的话得看你的体系有多大,如果太小,是会有影响的.另外你可以在设置PCR程序是稍微把体系设置大一点,比如你做30微升体系,你就设置成40微升.
希望我的回答能令你满意.
1，买贵的pcr管！推荐takara的。性价比比较好。盖的时候要对准，你把盖子边盖折了怎么用力压都没用了。我记得实时荧光定量pcr不能用太大体系吧？也用不着，试剂还挺贵的。再说你又不用产物。多加2、3微升的水就ok啦。另外我记得很早以前，为了防止蒸发是在所有的东西都加好了后，再加10ul的石蜡还是甘油来着。但是这个方法对qt-pcr应该行不通吧。毕竟要感光的说。
2，有影响！！对普通pcr...
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1，买贵的pcr管！推荐takara的。性价比比较好。盖的时候要对准，你把盖子边盖折了怎么用力压都没用了。我记得实时荧光定量pcr不能用太大体系吧？也用不着，试剂还挺贵的。再说你又不用产物。多加2、3微升的水就ok啦。另外我记得很早以前，为了防止蒸发是在所有的东西都加好了后，再加10ul的石蜡还是甘油来着。但是这个方法对qt-pcr应该行不通吧。毕竟要感光的说。
2，有影响！！对普通pcr没有影响，但是对qt-pcr有！除非你保证每个管都有一样的气泡，连standerd 里面也是。
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首先问一下，你观察一下，扩增反应跑完后，所有的液体都是在PCR管下部吗？有没有挂壁的？有挂壁的话，可能是仪器的热盖达不到设定的温度了。
你用的是什么品牌的PCR管？国产的吗？一般情况下，管子的质量不至于这么差。
液体有没有蒸发，可以从扩增曲线看出来，如果有蒸发的话，曲线会没有平台期，而是往下掉。
PCR反应管内有气泡的话，如果你的扩增程序中有一个温度在90度以上步骤的话，气...
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首先问一下，你观察一下，扩增反应跑完后，所有的液体都是在PCR管下部吗？有没有挂壁的？有挂壁的话，可能是仪器的热盖达不到设定的温度了。
你用的是什么品牌的PCR管？国产的吗？一般情况下，管子的质量不至于这么差。
液体有没有蒸发，可以从扩增曲线看出来，如果有蒸发的话，曲线会没有平台期，而是往下掉。
PCR反应管内有气泡的话，如果你的扩增程序中有一个温度在90度以上步骤的话，气泡一般会自行破裂，不会对结果造成影响。
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