奶牛胚胎性别鉴定和分割的过程?
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/08/27 10:16:37
奶牛胚胎性别鉴定和分割的过程?
奶牛胚胎性别鉴定和分割的过程?
奶牛胚胎性别鉴定和分割的过程?
奶牛业发展需要更多的母牛产奶,肉牛业发展需要更多的公牛长肉,奶牛及肉牛的纯种繁育场则需要更多的母牛育种?眼1,演.可见,在牛的生产中性别是一个非常重要的经济性状,为了控制牛的性别,人们经过不懈努力,用了几十年的时间来探索、研究和解决性别控制这一难题,今天这一难题已初步得到解决.目前,先利用分子生物学技术鉴别胚胎的性别,再结合胚胎移植,就可达到性别控制的目的,而且这也是一条有效的途径?眼1?演.具体操作按“超排-冲胚-性别鉴定-移植”的方式来控制奶牛生犊性别比例?眼3?演.就性别鉴定而言,比较实用的方法有LAMP法和PCR法,前种方法是由日本专家开发的,独家专有,使用须购买他们的仪器和试剂盒,成本比较高,后种方法操作简便、成本比较低,但检测时间是LAMP法的2~3倍?眼4?演.为了进一步掌握二者在实际应用中各自的优势,特进行了下列比较试验,以便奶牛业更好的利用现有技术对奶牛进行性别控制.
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 细胞 荷斯坦奶种公牛血液白细胞.
1.1.2 胚胎 荷斯坦奶牛鲜胚.
1.1.3 LAMP法性别鉴定试剂盒及LAMP仪 日本Eiken 公司.
1.1.4 PCR仪 GeneAmp公司.
1.1.5 引物及试剂 GIBCO公司.
1.1.6 显微操作仪 Lica公司.
1.2 方法
1.2.1 取样 胚胎在显微操作仪下,用切割刀切割下胚胎的十分之一样品供性别鉴定用,胚胎经平衡后进行移植.
1.2.2 PCR法 PCR管中12μl样品水溶液(大约相当于10个细胞)在95℃下处理5min,加15μl反应液(10Xbuffer、2.5μl,25mmol Mg?鄄Cl2、2.0μl,2.5mmol dNTP、2.5μl,100ng/μl P1、2.5μl,100ng/μl P2、2.5μl,5.0U/μl Taq酶、1μl),同时做阳性、阴性对照.以程序94℃,50sec;55℃,50sec;72℃,60sec.40个循环;72℃,5min;4℃保持到结束,3%琼脂糖(含EB)凝胶电泳,在紫外观察仪下检查结果
取样滋养层做DNA分析性别鉴定
用分割针或分割刀将胚胎切开。吸出其中的半个胚胎,注入预先准备号的空透明带或这节将裸半胚一直入受体,注意将内细胞团均等分割