想请教一下RACE特异性引物的设计：1,3'RACE就在越靠近3'端设计.5'RACE就在越靠近5'端设计.是不是越靠两头越好?2,两者没什么关系,可以分开设计是吗?两个引物是不是都跟模板相同的?而不是设计

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/15 19:43:38

想请教一下RACE特异性引物的设计：1,3'RACE就在越靠近3'端设计.5'RACE就在越靠近5'端设计.是不是越靠两头越好?2,两者没什么关系,可以分开设计是吗?两个引物是不是都跟模板相同的?而不是设计
想请教一下RACE特异性引物的设计：
1,3'RACE就在越靠近3'端设计.5'RACE就在越靠近5'端设计.是不是越靠两头越好?
2,两者没什么关系,可以分开设计是吗?两个引物是不是都跟模板相同的?而不是设计一对引物的时候3'端要反向互补?
3,长度就是23-28个碱基是吗?.GC 50-70 Tm 70
4,是只要设计一个就好?还是同时设计几个好?

想请教一下RACE特异性引物的设计：1,3'RACE就在越靠近3'端设计.5'RACE就在越靠近5'端设计.是不是越靠两头越好?2,两者没什么关系,可以分开设计是吗?两个引物是不是都跟模板相同的?而不是设计
1 越靠两头越好,因为靠近两头扩增的两个片段就短,将来测序的时候花钱少,但前提是你得保证引物的TM值和RACE配套引物的TM值接近,还有引物的GC含量别太离谱
2 可以分开设计,但是5‘race 我们自己设计的引物时下游引物,应和已知序列模版片段反向互补,3’race我们设计的是上游引物和已知序列模版片段相同
3 设计原则（说明书提供）：
（1）引物长度以20-28 nt为宜.
（2）引物中的GC含量一般为45%-55％,GC、AT分布均匀,应尽量避免局部富含GC或AT.
（3）引物最好不形成二级结构（发夹结构等）,与5′RACE Outer Primer和5′RACE Inner Primer不能形成复杂结构.
（4） 引物3′端的3～4个碱基不要与配对引物形成互补序列.
我个人比较看重自设引物的TM值和RACE引物的TM值是否接近,GC含量别太离谱就行,其他基本不考虑
4 一般5‘Race的自设下游引物是两个,其中一条在另一条的上游相距几个碱基（自己掌握）,用于巢式PCR,就是用RACE自带的上游引物和那个你自己设计的靠下游的下游引物进行第一轮PCR,再用PCR产物做模板以RACE自带的上游引物和那个你自己设计的靠上游的下游引物进行第二轮PCR,这样扩增的结果比较可靠,如果第二轮P不出来,说明第一轮P的产物可能存在问题,即可能是失败的.如果你资金比较充足,老板比较大方,可以多设几条以防不测

不一定啊，用的是la的话，酶最多能扩5kbp多吧，最主要的还是你的引物，位置是其次

想请教一下RACE特异性引物的设计：1,3'RACE就在越靠近3'端设计.5'RACE就在越靠近5'端设计.是不是越靠两头越好?2,两者没什么关系,可以分开设计是吗?两个引物是不是都跟模板相同的?而不是设计 请教:PCR中,怎样检测自己设计引物的特异性请教达人,怎样用primer5检测自己设计的引物与模板（一个含有目的基因的载体）间的特异性?请详细点,非常感谢! 序列特异性引物怎么设计就是在ssp-pcr的引物怎么样设计的 原理是什么 如何设计3‘和5’RACE的引物? 那个RACE设计引物具体怎么做的?求指教 如何设计3‘和5’RACE的引物? 【引物设计】为什么引物太长也会降低PCR的特异性设计引物时,引物太短会降低PCR的特异性,这点好理解,但为什么引物太长也会呢?烦请各位路过的、知道的解疑, 什么是PCR引物的特异性 怎么检验引物的特异性 请提供一下在蛋白原核克隆、纯化和表达中所需要使用的实验技术,具体一点,如：特异性引物的设计、合成以及优化. 【求助】请教：加HIS标签的引物如何设计 如何设计特异性引物我没学过分子方面的理论知识,但是现在我想做一个真菌的分子检测,就想设计一对引物进行特异性检测.要与其他不同的参考菌株做检测,那是不是在我使用软件设计引物的 现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来回收的片段1K左右 怎样用用NCBI验证引物的特异性 primer 与BLAST 设计引物哪个好?设计引物遇到点问题,用primer 设计的引物,特异性不好.而用BLAST设计的引物又无法了解引物的一些特性.哪个更好呢?不知道用primer可不可以检测BLAST设计的引物的特 PCR引物设计不好,如何提高引物特异性?设计的PCR引物都是80多分的样子,但是一旦加上酶切位点和保护碱基以后,引物的特异性就变得特别差,如何解决这种问题,有没有什么设计引物的技巧呢? 如何设计随机引物我是想克隆一段 已经转入水稻基因组的 外源基因。打算设计一对引物 其5‘端使用随机引物，中间用特异性内切酶序列，3’端使用已知目的基因两端序列。（因为完全使 有没有高手会设计引物呢,帮帮忙,急用引物,方便的留下邮箱帮忙设计一下,谢谢谢谢!