作业帮如果希望在哺乳动物细胞中表达X基因,表达载体的选择标准是什么?如何将表达的重组体转化入宿主细胞?如何检测是否转化?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/15 22:53:45
如果希望在哺乳动物细胞中表达X基因,表达载体的选择标准是什么?如何将表达的重组体转化入宿主细胞?如何检测是否转化?
如果希望在哺乳动物细胞中表达X基因,表达载体的选择标准是什么?如何将表达的重组体转化入宿主细胞?如何检测是否转化?
如果希望在哺乳动物细胞中表达X基因,表达载体的选择标准是什么?如何将表达的重组体转化入宿主细胞?如何检测是否转化?
1 选择载体标准：采用能够在真哺乳动物细胞中能够正常转录的,由启动子、加PolyA 信号,转录终止和可能的内含子、增强子等组成的表达盒的载体,通常还有真核复制起始区,如SV40 ori.
2 转染：化学法如磷酸钙共沉淀,脂质体,或者物理的电穿孔法,都有现成的试剂或者仪器可进行
3 检测：可以用载体上所带抗生素,或者测定目的基因表达：转录产物：real time PCR,翻译产物：western blot
楼主，表达载体的选择标准肯定是要能在动物细胞中进行正常表达，例如细胞中的RNA聚合酶必须要能识别表达载体上的启动子，一般不使用哺乳动物的细胞，多采用细菌。表达载体转入宿主细胞的方法，仍然是先把宿主细胞制备为感受态，然后直接转化。检测的话最可靠的是对目的基因进行诱导表达，对表达产物做一个western杂交，当然这一步要求你表达的蛋白质要有相应的抗体。...
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楼主，表达载体的选择标准肯定是要能在动物细胞中进行正常表达，例如细胞中的RNA聚合酶必须要能识别表达载体上的启动子，一般不使用哺乳动物的细胞，多采用细菌。表达载体转入宿主细胞的方法，仍然是先把宿主细胞制备为感受态，然后直接转化。检测的话最可靠的是对目的基因进行诱导表达，对表达产物做一个western杂交，当然这一步要求你表达的蛋白质要有相应的抗体。
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如果希望在哺乳动物细胞中表达X基因,表达载体的选择标准是什么?如何将表达的重组体转化入宿主细胞?如何检测是否转化?
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