关于PCR产物酶切要构建一个载体目的基因PCR回收后做双酶切应该做多大的体系50 or 100?各种成分为多少?望大家不吝赐教!谢谢!

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/15 01:21:20

关于PCR产物酶切要构建一个载体目的基因PCR回收后做双酶切应该做多大的体系50 or 100?各种成分为多少?望大家不吝赐教!谢谢!
关于PCR产物酶切
要构建一个载体
目的基因PCR回收后做双酶切
应该做多大的体系
50 or 100?
各种成分为多少?
望大家不吝赐教!
谢谢!

关于PCR产物酶切要构建一个载体目的基因PCR回收后做双酶切应该做多大的体系50 or 100?各种成分为多少?望大家不吝赐教!谢谢!
.
同步双酶切
同步双酶切是一种省时省力的常用方法.选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步.NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NEBuffer,以保证100%的酶活性.NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的说明书.能在最大程度上保证两种酶活性的缓冲液即可用于双酶切.由于内切酶在非最佳缓冲液条件下的切割速率会减缓,因此使用时可根据每种酶在非最优缓冲液中的具体活性相应调整酶量和反应时间.
2、分步酶切
如果找不到一种可以同时适合两种酶的缓冲液,就只能采用分步酶切.分步酶切应从反应要求盐浓度低的酶开始,酶切完毕后再调整盐浓度直至满足第二种酶的要求,然后加入第二种酶完成双酶切反应.
反应体系的话酶供应上岁产品会给相应的建议.体积多大要看个人实验所需,如果下游实验需要DNA的量很大那建议使用100ul的,如果需要的没有那么多,使用25ul或50ul也就够了.

双酶切体系做10微升就行了.Buffer 1,双酶切的两种酶各 1 ,PCR回收产物7,就可以了.
构建载体:连结体系:Buffer 1,载体 1,T4连结酶 1,双酶切回收产物 7.

关于PCR产物酶切要构建一个载体目的基因PCR回收后做双酶切应该做多大的体系50 or 100?各种成分为多少?望大家不吝赐教!谢谢! 如何验证载体质粒的酶切位点已被切开?PCR产物(目的基因)被酶切开? 有别人构建好的含有目的基因的表达载体质粒,但是只知道目的基因的mRNA序列,如何做PCR检测目的基因? 关于载体构建的问题我要构建一个GFP表达载体标记人体骨髓间充质干细胞的黏着斑,我想问一下这个载体的目的基因怎么获得?质粒载体用哪种比较好? 如何构建一个能高效表达目的基因的表达型载体 设计构建一个载体,将目的基因在植物根系表达并向根细胞外分泌. 如果是载体是环形基因,PCR扩充目的基因时,限制酶的切法 载体构建酶切位点的问题18—T克隆载体与目的基因连接后,送去测序,Blast之后得到序列,上面含有下一步的酶切位点,请问,目的基因序列包括酶切位点序列吗,师姐说不包括.酶切位点是PCR时加入 如何构建基因载体 从克隆载体上PCR出目的基因原理 转基因为什么不能直接用PCR产物连接在表达载体上?我在做小麦转基因到拟南芥中,今天在想为什么不能把目标基因PCR后直接表达载体构建,而要用克隆载体后再构建表达载体? 构建酵母表达载体,目的基因来自植物体,可以含有启动子,内含子,构建酵母表达载体,目的基因来自植物体.请问可以用直接提取DNA,设计引物pcr扩增得到的基因片段来连接转化吗?目的基因里可 构建载体的时候,先用设计好的引物PCR所要的目的基因,再和T载体连接,再转化,再小抽,再双酶切,再和已经预先双酶切的目的载体连接,那么?先前的目的基因为什么不直接和目的载体相连呢?为什 我有一段目的基因,需要构建表达载体,此时是扩增目的基因的全长还是?我用premier 5.0设计引物,然后扩增产物长度是200多,但我的目的基因是700多.需要构建表达载体,是扩增目的基因全长吗? 基因的构建与基因的克隆是指一个意思么?就是通过PCR扩增获得目的基因?问题很小白哈. 在基因表达构建载体中什么切割质粒什么切割目的基因,为什么? 基因文库中获取目的基因能直接用于载体的构建 怎么样构建基因表达载体