双酶切质粒后电泳 双酶切质粒pgl 6.24（5882bp）无共同buffer kPN I 2.5小时 bgl II 3.5小时 之后电泳 为什么出来1万多的带?跑的比原来质粒还有10000bp的marker还慢……怎么回事啊……求高人指点

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/09 09:59:53

双酶切质粒后电泳 双酶切质粒pgl 6.24（5882bp）无共同buffer kPN I 2.5小时 bgl II 3.5小时 之后电泳 为什么出来1万多的带?跑的比原来质粒还有10000bp的marker还慢……怎么回事啊……求高人指点
双酶切质粒后电泳
双酶切质粒pgl 6.24（5882bp）无共同buffer kPN I 2.5小时 bgl II 3.5小时 之后电泳 为什么出来1万多的带?跑的比原来质粒还有10000bp的marker还慢……怎么回事啊……求高人指点

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很显然是质粒发生了自连啦.切开的2个质粒连起来了,因此相当于2个质粒的大小.你需采用磷酸化避免自连发生.

双拷贝质粒，

请首先检查酶切前空载体的大小。最好先在KpnI单切以后，BglII二次酶切前，先检测一下，确认质粒的实际大小；确认无误了再进行BglII二次酶切。分段进行验证排查。
单纯的酶切后没有连接酶时，能引发自连的说法，理论上也许有；不过从我的7,8年的实验经历中，从来没有听说过谁真的出现过，更是从来没有见过。
从我以往的经历出发，最可能出现的问题就是使用了错误的质粒，或者质粒中有所不知道的...

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请首先检查酶切前空载体的大小。最好先在KpnI单切以后，BglII二次酶切前，先检测一下，确认质粒的实际大小；确认无误了再进行BglII二次酶切。分段进行验证排查。
单纯的酶切后没有连接酶时，能引发自连的说法，理论上也许有；不过从我的7,8年的实验经历中，从来没有听说过谁真的出现过，更是从来没有见过。
从我以往的经历出发，最可能出现的问题就是使用了错误的质粒，或者质粒中有所不知道的外源序列。一般情况下我会依照质粒图谱，对质粒进行酶切或者PCR确认。甚至是抽质粒时出现的基因组碎片污染都有可能。

收起

双酶切质粒后电泳 双酶切质粒pgl 6.24（5882bp）无共同buffer kPN I 2.5小时 bgl II 3.5小时 之后电泳 为什么出来1万多的带?跑的比原来质粒还有10000bp的marker还慢……怎么回事啊……求高人指点 质粒PCR后电泳出现 很多条带 怎么回事啊? 质粒PCR后电泳出现 很多条带 怎么回事啊? 质粒提取后不干燥能电泳检测吗? 为什么用碱法提取质粒,电泳后没有出现条带呢? 琼脂糖凝胶电泳双酶切为什么没有目的基因条带我用的10000的MARKER,我的重组质粒有6000多BP,质粒5300多BP,电泳后发现只有重组质粒的条带和切下来的质粒条带,在1000BP左右并没有发现我目的基因 提取质粒酶切后,双酶切和单酶切电泳条带一样,是怎么回事啊? 碱裂解法提取质粒后 电泳拖尾严重,是什么原因?提取质粒时 有用RNase处理 重组质粒鉴定pcr没条带,酶切有条带我有两种重组质粒,两个基因片段大小一样,我的重组质粒都与空质粒大小相差300左右,但是用0.9%的胶140v电泳,无法区分大小,重组质粒进行双酶切,都出现了疑 重组质粒进行双酶切鉴定时电泳结果显示对比质粒（就是重组质粒）的条带,在酶切后大、小片段的中间理论上不是应该对照质粒的条带在最后面的么?什么原因呀?质粒是用玻璃纤维住快速抽 双酶切连接后转化,长出了菌落,但提质粒跑电泳,分子量比目的质粒大很多,为什么 质粒DNA电泳后应该是几条带? 急求,谢谢各位大侠! 质粒提出来后,电泳只有一条比较粗的带,为何?酶切后全是拖行带, 为什么对重组质粒DNA进行双酶切 如果质粒dna双酶切电泳后,在胶上出现1）没有条带2）一条3）两条4）三条5）多条,都是什么原因? 重组质粒后为什么还需要双酶切、PCR鉴定并测序分析 重组质粒后为什么还需要双酶切、PCR鉴定并测序分析 质粒DNA电泳的三条带各是什么?