作业帮谁知道免疫沉淀的优点谁知道免疫沉淀的具体内容,特点啊,优点啊都可以
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/15 12:57:42
谁知道免疫沉淀的优点谁知道免疫沉淀的具体内容,特点啊,优点啊都可以
谁知道免疫沉淀的优点
谁知道免疫沉淀的具体内容,特点啊,优点啊都可以
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免疫沉淀是利用特异性抗体识别并分离抗原的方法.
材料：
上样buffer的配方(用前现配):
2ul 1.25M Tris-HCL ,pH 6.8
35ul distilled water
2.5ul 2-mercaptoethanol
12.5ul 10%SDS
10ul 80% glycerol
2ul bromphenol blue
TNE buffer:
10mM Tris-HCl pH 8.0
10mM NaCl
0.5mM EDTA
方法：
1．用含有1% NP40的缓冲液重悬细胞,充分振荡.
2．在冰上孵育30分钟或37℃孵育10—15分钟
3．转入eppendorf管中离心3分钟
4．将上清轻轻倒入一干净试管,加入40—50 ul抗血清
5．冰上孵育2小时或4℃过夜
6．在TNE中加入100ul SPA 和100ul 5% BSA
7．冰上孵育2小时
8．离心使免疫复合物成球,用1ml含1%NP40,0.5% Na deoxychloate,0.1% SDS 的TNE,在用超声波重悬
9．加入70ul的上样缓冲液,振荡.
10．热水中水浴90秒,离心1分钟,保留上清.
11．若不立即实验请低温保存.
（以上资料仅供参考）
免疫细胞化学：
1．在无菌消毒的6孔板中加入100,000个/孔细胞,过夜
2．倒掉上清,用PBS洗涤一次后立即加入-20°C的甲醇（注意不要让细胞干掉）,再将板置于-20°C冰箱5分钟,然后倒掉甲醇加入PHEM 缓冲液,置于4°C.
3．加入含合适血清（2.5—5%）的PHEM 缓冲液轻微振摇一小时
4．加入一抗至封板缓冲液,轻微振摇孵育一小时
5．倒掉封板液,加入PHEM 缓冲液洗涤4次,每次10分钟
6．加入二抗至封板缓冲液,轻微振摇孵育半小时
7．倒掉封板液,加入PHEM 缓冲液洗涤4次,每次10分钟
8．用镊子夹起 coverslip,轻轻去除过多的缓冲液,加入约20ul“antifade”,轻轻盖上coverslip,去掉过多的”antifade” 后置于-20°C避光保存.
试剂配方：
PHEM 缓冲液：:
25 mM HEPES
10 mM EGTA
60 mM PIPES
2 mM MgCl2
pH = 6.9
（请以此顺序加入）
Antifade:1 ml
1 mg p-phenylene diamine hydrochloride 溶解在 0.1 ml 10x PBS (20 min 室温)
加入 0.9 ml 100% 甘油,封闭保存不要振摇.
若颜色变成棕色,请不要用了.分装保存在-70 °C