用自己设计的引物pcr目的基因的保守区,总是不成功,大概都有什么原因~

用自己设计的引物pcr目的基因的保守区,总是不成功,大概都有什么原因~ PCR引物设计中的问题、保守序列在目的基因内、但是引物为什么在保守序列设计?设计引物为什么一定要在保守序列内设计?保守序列在ORF内,在保守序列内设计引物怎么得到能够完整表达的核 设计简单的引物；如何通过PCR获得目的基因 RT-PCR的引物如何设计?本人刚接触RT-PCR,需要从其它几个物种基因的保守序列中,设计出另一个物种这个基因RT-PCR引物,但是实在是一头雾水, scleraxis的基因序列 设计引物scleraxis(scx)的大鼠基因序列 做PCR设计引物用 测mRNA 荧光定量PCR引物设计本人在做荧光定量PCR之前,先用Primer 3.0设计了目的基因的引物,用于半定量PCR,而且也把引物放入NCBI中进行了blast比对,得到引物为特异性引物,半定量PCR效果也跟预期一样,电 如何读基因序列,设计引物时的保守区指那一段序列 请教:PCR中,怎样检测自己设计引物的特异性请教达人,怎样用primer5检测自己设计的引物与模板（一个含有目的基因的载体）间的特异性?请详细点,非常感谢! PCR只有引物二聚体的条带,没有目的基因条带 从NCBI上查找到的一个目的基因做PCR,设计引物时PCR产物长度是这个基因的全部序列吗?CAGTCTAATGATTACCGTCCTTCATACCACTTCACACCGGACCAGTACTGGATGAACGAGCCAAACGGCCTGATTAAAATCGGATCCACCTGGCACCTGTTCTTTCAACACAATCCGACGGCCAATGTATGGGGCAACA 大侠们,我现在做PCR,用的是师姐设计的引物序列,怎么才能知道目的基因片段的大小 RT-PCR模板选择问题.我是准备设计简并引物扩增一个鱼类的未知基因的保守区.一些文献上是提取脑部总RNA,然后反转录得到第一链CDNA,然后用这CDNA做模板扩增保守区.但是我老师的想法是直接提 PCR引物是目的基因中的一段么,还是和目的基因中的某段是互补的? PCR的引物怎样设计, rt pcr的引物设计 PCR扩增基因设计引物时,用Primer5检测上游引物和下游引物的互补性,显示free energy= 1.50 Kcal/mol这样的引物可用吗? 我有一个100bp左右的目的序列,怎么设计pcr引物.还有,对于对于一个比较大的基因来说,为什么有人会从这个基因的中间设计引物,这样可以p出这个基因吗? 普通PCR和基因克隆PCR的引物设计有什么不同和注意事项?