归纳真菌和细菌保存物品的方法和原理

归纳真菌和细菌保存物品的方法和原理
归纳真菌和细菌保存物品的方法和原理

归纳真菌和细菌保存物品的方法和原理
1 微生物菌种保藏的基拳原理
菌种保藏主要是根据微生物生理生化特点, 人工
创造条件, 使微生物代谢处于不活泼、 生长繁殖受抑
制的休眠状态, 即采取低温、 干燥、 缺氧 3 个条件, 使
菌种暂时处于休眠状态. 一种好的保藏方法首先应能
长期保持菌种原有的优良性状不变, 同时还需考虑到
方法本身的简便和经济, 以便生产上能推广使用[ 妇 .
2 微生物菌种的保藏方法
2 ． 1 定期移植法
亦称传代培养保藏法, 包括斜面培养、 穿刺培养、
液体培养( 保藏厌氧细菌用) 等. 将菌种接种于适宜的
培养基中, 最适条件下培养, 待生长充分后, 于 4 ～
6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养. 保藏时
间依微生物的种类不同而不同.
此法操作简单, 但保存时间短, 需要经常移种, 易
于变异.只能作为菌种的短期保藏.
2 ． 2 液体石蜡保藏法
亦称矿物油保藏法.选用优质化学纯液体石蜡,
采用以下两种方式进行灭菌：①1 2 1℃湿热灭菌
3 0 m i n , 置 4 0℃恒温箱中蒸发水分, 经无菌检查后
备用.②1 6 0℃干热灭菌 2 h , 冷却后, 经无菌检查后
[ 收稿 日期] 2 0 0 9 — 0 3 — 1 3
【 作者简介】 董 昧 ( 1 9 7 8 - ) , 女, 助工, 从事菌种选育工作.
备用圆.把液体石蜡注入已长好菌的斜面上并高出斜
面顶端 1 c m , 使菌种与空气隔绝.将试管直立, 置低
温( 4 ～6℃)干燥处或室温下保存. 保藏期间应定期
检查, 如培养基露出液面, 应及时补充无菌的液体石
蜡. .
此方法简便有效, 保藏时间2 - - ~ i 0年, 可用于丝
状真菌、 酵母、 细菌和放线菌的保藏. 特别对难于冷冻
干燥的丝状真菌和难以在固体培养基上形成孢子的
担子菌等的保藏更为有效.缺点是必须直立存放, 占
空间大, 不便携带嘲 .某些以石蜡为碳源, 或对液体石
蜡保藏敏感的菌株都不能用此法保藏闯 .
2 ． 3 沙土管保藏法
取 6 0 ~ - - 8 0目河沙, 用吸铁石吸去铁质, 用 1 0 ％ 盐
酸浸泡 2 4 h 后弃盐酸, 用水洗至中性, 将沙子烘干备
用. 取地面下4 0 - - - , 6 0 c m非耕作层贫瘠且粘性较小的
土, 研碎后 1 0 0目过筛并用水洗至中性, 烘干备用. 将
处理后的沙、 土按质量比2： 1 混合. 混匀的沙土分装
入安瓿管或小试管中, 高度为 1 a m左右, 塞好棉塞,
1 2 1℃湿热灭菌 3 0 m i n , 无菌检验合格后方可使用.
把制备好的菌悬液分装每支沙土管0 ． 5 m L ,放线菌
和霉菌可直接挑取孢子拌入沙土管中. 塞好棉塞放入
盛有干燥剂的容器中, 用真空泵抽去水分.抽检合格
后封口, 存放于低温( 4 - - ． , 6℃) 干燥处保藏, 每隔半年
验证 1 次.
本法方法简便, 设备简单, 适用于产孢子和有芽
孢的菌种保藏, 可保存两年, 但对营养细胞不适用. 由
于在真空干燥过程中,机械力容易造成孢子的死亡,
因此在保藏放线菌和部分真菌的孢子时最好用干法
接种闯 .
2 . 4 真空冷冻干燥保藏法 第 7期 董 昧： 微生物菌种保藏方法 ． 3 5 -
2 ． 4 ． 1 好氧茵冷冻干燥管的制备
安瓿管用 2 9 6 盐酸浸泡过夜,用 自来水冲洗并用
蒸馏水浸泡至p H中性, 烘干后加入脱脂棉塞, 灭菌备
用. 保护剂可选择血清、 脱脂牛奶和海藻糖等. 将培养
好的茵体或孢子加入保护剂制成菌悬液, 分装于安瓿
管中, 每支 0 ． 2 m L .然后放入冰箱冷冻 2 h以上, 达
到一 2 0 ～3 5℃左右.再置于冷冻干燥箱内进行冷冻
干燥直至其中水分被抽干, 时间一般为 8 - - - 2 0 h .将
安瓿管在真空条件下熔封, 低温或常温保藏.
2 ． 4 ． 2 厌氧茵冷冻干燥管的制备
主要程序与需氧茵操作相同, 注意保护剂的选择
和准备,保护剂使用前应在 1 0 0℃的沸水中煮沸
1 5 m i n左右, 脱气后放入冷水中急冷, 除掉保护剂中
的溶解氧.
此法为菌种保藏方法中应用最广泛的, 是国际菌
种保藏机构通常采用的方法之一, 几乎所有的微生物
均可采用此法保藏.适用于菌种长期保存, 一般可保
存数年至十余年翻.方便之处在于因冷冻干燥管无需
低温保藏, 所以运输方便, 但此法所需设备要求高, 操
作复杂, 费用昂贵.
2 ． 5 冷冻保藏法
2 ． 5 ． 1 普通冷冻保藏技术( _ 2 0℃)
将培养好的固体或液体菌种用橡胶塞封口, 置于
普通冰箱中保藏. 这一方法虽操作简单但不适宜长期
保藏.
2 ． 5 ． 2 超低温冷冻保藏技术( - 6 0 ～ - 8 0℃)
将生长至对数生长中后期的微生物细胞, 加入新
鲜培养基使其悬浮,然后加入等体积的2 0 ％ 甘油或
1 0 ％~ - -甲基亚砜作为冷冻保护剂,混匀后分装入冷冻
管或安瓿管中, 于 - 7 0℃超低温冰箱中保藏.若干细
菌和真菌菌种可通过此保藏方法保藏 5 年而活力不
受影响.
2 ． 5 ． 3 液氮超低温保藏法
主要程序与超低温冷冻保藏技术( 一 6 0 ～一 8 0℃)
相同. 需注意分装好的安瓿管在放入液氮前需用控速
冷冻机预冻,冷冻速率以 l℃／ m i n为宜,冷冻到
一
3 5℃.如果无控速冷冻机, 可将安瓿管置于- 7 0℃
冰箱中冷冻4 h , 然后迅速移入液氮罐中保存.使用
时从液氮罐中取出, 立即放置在 3 8 " ' 4 0℃水浴中使
其溶化, 而后直接将其接种到适宜的培养基中即可.
此法存活率高, 稳定性强, 保藏时间长, 是长期保
藏菌种的最好方法.适用于各种菌种的保藏, 特别适
用于难以用真空干燥保藏等方法保藏的菌种翻.此法
需定期向液氮罐中补充液氮,以保证液氮罐中的温
度.