作业帮如何测定过氧化氢酶活性关于微生物的酶测定
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/08 00:41:04
如何测定过氧化氢酶活性关于微生物的酶测定
如何测定过氧化氢酶活性
关于微生物的酶测定
如何测定过氧化氢酶活性关于微生物的酶测定
看一下吧,比较全
一、目的
过氧化氢酶普遍存在于植物组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力均有关系，故常加以测定。通过实验可了解过氧化氢酶的作用，并掌握测定过氧化氢酶活性的原理和方法。
二、原理
过氧化氢酶把过氧化氢分解为水和氧，其活性大小，以一定时间内分解的过氧化氢量来表示，当酶与底物（H2O2）反应结束后，用碘量法测定未分解的H2O2量。以钼酸铵作催化剂，使H2O2与KI反应，放...
全部展开
一、目的
过氧化氢酶普遍存在于植物组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力均有关系，故常加以测定。通过实验可了解过氧化氢酶的作用，并掌握测定过氧化氢酶活性的原理和方法。
二、原理
过氧化氢酶把过氧化氢分解为水和氧，其活性大小，以一定时间内分解的过氧化氢量来表示，当酶与底物（H2O2）反应结束后，用碘量法测定未分解的H2O2量。以钼酸铵作催化剂，使H2O2与KI反应，放出游离碘，然后用硫代硫酸钠滴定碘，其反应式为：
H2O2 + 2KI + H2SO4 —→I2 + K2SO4 + 2H2O
I2 + 2Na2S2O3 —→2NaI + Na2S4O6
根据空白和测定二者硫代硫酸钠滴定用量之差，即可求出过氧化氢酶分解H2O2的量。
四、实验步骤
1. 过氧化氢酶的提取
选取甘蔗功能叶片，擦净去主脉剪成碎片，混匀后迅速称取1g放入经冷冻过的研钵中，加少量CaCO3粉末及石英砂，并加入3～4ml蒸馏水，在冰浴上研磨至匀浆，用蒸馏水将匀浆通过漏斗洗入100ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀后过滤。然后再取滤液10ml至100ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀即为酶稀释液。
2. 酶活性测定
2.1取100ml容量瓶4个，编号，向各瓶准确加入稀释后的酶液10ml，立即向3、4号瓶中加入1.8mol·L－1H2SO4 5ml以终止酶活性，作为空白测定。
2.2将各瓶放在20℃水浴中保温5～10min（若室温超过20℃则以室温为准）。保温后向各瓶准确加入 0.018％H2O2 5ml, 摇匀并记录酶促反应开始时间。
2.3将各瓶放在20℃水浴中让酶与底物（H2O2）作用5min。时间到后迅速取出，立即在1、2号瓶中加入1.8mol·L－1H2SO4 5ml以终止酶活性。
2.4向4个瓶中各加入20％KI 1ml和3滴10％(NH4.)6MO7O4，摇匀，用0.02 mol·L－1 Na2S2O3
滴定至淡黄色后再加入5滴1％淀粉液作指示剂，再用0.02 mol·L－1 Na2S2O3滴定至蓝色刚消失为滴定终点，记录Na2S2O3用量。
收起