血浆中蛋白质含量测定用什么方法?另外,收集的血浆标本怎样保存?
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/08/28 07:41:38
血浆中蛋白质含量测定用什么方法?另外,收集的血浆标本怎样保存?
血浆中蛋白质含量测定用什么方法?另外,收集的血浆标本怎样保存?
血浆中蛋白质含量测定用什么方法?另外,收集的血浆标本怎样保存?
下面是蛋白质测定的方法:定氮法,双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法.考马斯亮蓝法(Bradford法).
凯氏定氮 灵敏度低,适用于0.1.0mg氮,误差为 ±2% 费时
10小时 将蛋白氮转化为氨,用酸吸收后滴定 非蛋白氮(可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离) 用于标准蛋白质含量的准确测定;干扰少;费时太长
双缩脲法(Biuret法) 灵敏度低 20mg 中速 20~30分钟 多肽键+碱性Cu2+®紫色络合物 硫酸铵;Tris缓冲液;某些氨基酸 用于快速测定,但不太灵敏;不同蛋白质显色相似
紫外吸收法 较为灵敏 50~100mg 快速 10分钟 蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收 各种嘌吟和嘧啶;
Folin-酚试剂法(Lowry法) 灵敏度高 5mg 慢速 40~60分钟 双缩脲反应;磷钼酸-磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原 硫酸铵;Tris缓冲液;甘氨酸;
各种硫醇 耗费时间长;操作要严格计时;颜色深浅随不同蛋白质变化
考马斯亮蓝法(Bradford法) 灵敏度最高 5mg 快速5~15分钟 考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时,其lmax由465nm变为595nm 强碱性缓冲液;
SDS 最好的方法;干扰物质少;颜色稳定; 颜色深浅随不同蛋白质变化
至于收集的血浆标本怎样保存,个人认为是冷冻.或者冷藏.
这是我找来的,供你参考.
采集血液的时候加入抗凝剂,防止血液凝固,然后4度5000rpm离心收集细胞,然后保存于-80度超低温冰箱里.
再拿出来提取DNA用于做PCR就好.
提取血液的DNA是针对血液里的白细胞,红细胞是没有细胞核的,将白细胞直接分离出来提DNA效果会更好一点.其实凝固的全血也是能够提出DNA的,但是产率和质量可能会低.
提取DNA的时候最好是保持样品新鲜,-20度不是长期保存组织的方法,最好还是-80度保存样品.