苯酚-氯仿法提取DNA注意事项
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/06 09:40:20
苯酚-氯仿法提取DNA注意事项
苯酚-氯仿法提取DNA注意事项
苯酚-氯仿法提取DNA注意事项
1、苯酚-氯仿是除蛋白的,所以要充分震荡混匀使蛋白变性,但又不能太剧烈而打断DNA;
2、离心后要避免再次吸入有机相的苯酚-氯仿,尽量只取上清.
我想最主要的是防止DNA损伤,包括各种物理、化学因素、机械损伤等等。
组织抽提前应保存于液氮中,以免DNA受到破坏;纯化时应时刻注意抑制核酸酶的污染,使用EDTA等防止DNA降解。
剧烈振荡可使DNA断裂,故操作时应尽量轻柔、缓慢地颠倒混匀。
要获得高纯度DNA,可加入蛋白酶K降解蛋白质。
DNA在260nm处有一吸收峰,而蛋白质在280nm处有吸收峰。当纯度比值小于1.6时,应考虑进行再次纯化。
整个实验须接触多种有毒、有腐...
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组织抽提前应保存于液氮中,以免DNA受到破坏;纯化时应时刻注意抑制核酸酶的污染,使用EDTA等防止DNA降解。
剧烈振荡可使DNA断裂,故操作时应尽量轻柔、缓慢地颠倒混匀。
要获得高纯度DNA,可加入蛋白酶K降解蛋白质。
DNA在260nm处有一吸收峰,而蛋白质在280nm处有吸收峰。当纯度比值小于1.6时,应考虑进行再次纯化。
整个实验须接触多种有毒、有腐蚀性试剂,故应注意操作规范安全。
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