我的片段转入ppicza载体后转化到DH5a里,菌落PCR验证成功,为何就是提不出质粒?

我的片段转入ppicza载体后转化到DH5a里,菌落PCR验证成功,为何就是提不出质粒? 目的片段转入表达载体后我用什么方法可以检测我的目的质粒? 目的片段转入表达载体后,用什么方法检测?有没有除了测序,酶切,PCR,探针检测以外的方法?最好详细点. 电转化酵母后,涂布YPDS平板仅有少数单克隆出现,挑单科,摇菌 诱导,所有都没有表达,请问什么原因本人是新手,载体是pPICZA,宿主菌是GS115 TA克隆全是阴性我把1400bp的片段连接到宝生物的PMD18-T载体上,转化后,全是白斑,但是挑了二十个全是空载体, 如何将两个外源基因导入到一个质粒载体?有一段平末端编码人VEGF基因的DNA片段,怎样将其插入到含有EcoRI和BamH I限制位点的PET28a载体中去?插入后重组载体转化大肠杆菌DH5.我们要插入这个外源 载体与插入片段连接好后 进入宿主细胞转化 这个时候已经有了一次转化 为什么到后面又要转化呢?将载体与插入片段连接上之后,进入到宿主细胞转化：A：200ul感受态细胞加入连接产物后 轻 我的目的片段连载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR,没有条带. 请问将载体与插入片段连接好后 进入宿主细胞转化 这个时候已经有个一次转化 为什么到后面又要用质粒转...请问将载体与插入片段连接好后 进入宿主细胞转化 这个时候已经有个一次转化 酶切不出来,是怎么回事?转化涂板挑菌后,摇菌6-8h后,我用先前目的片段的引物,做了个菌液PCR,电泳后表明目的片段从菌液中扩出来了,这个应该说明目的片段连接到载体中了的,但我提出质粒后, 在我做的载体与片段连接中,在转化后,酶切后质粒是不长的,而重组后的长了,可是,最后结果却是.结果是,片段根本没有连进去,连进去的却是一个远远大于我的目的片段的碱基序列,这是为什么 T载体连接问题现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到 转化到大肠杆菌中的质粒会甲基化吗?看到文献说大肠杆菌中的质粒会甲基化,那么用T载体与目的片段连接后转化到大肠杆菌中,会被甲基化吗?急, 农杆菌质粒转化拟南芥等用的农杆菌中,其自身含有几个质粒,大小分别是?我将PBI121为骨架的载体转入农杆菌后,提质粒大小不对,而且有两条带.疑惑中... 约1800长度的片段,pcr扩增后显示长度合适,进行t-blunt载体克隆,转化感受态细胞,长出菌很少,甚至没有 PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体+目的片段,那么转化挑克隆提取的质粒片段是多大?PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体的序列是大约3000bp,PCR产物的目的片段是450bp,那么：经过连接、转化后挑单克隆,提取质粒,提 我在构建质粒：载体大小为9kb,目的片段为3.4kb,连接产物可以用普通的热击方法转化感受态Ecoli.DH5a吗? 转化后PCR无条带把连接产物连接到T载体之后转化大肠杆菌,用连接产物片段上有而T载体上没有的Kana抗性进行筛选,有转化子长出.培养转化子后PCR,却扩增不出目的条带（即之前的连接产物,约3k