微生物实验怎么配培养基的成分啊?能详细到各类微生物更好因为要做的实验是寻找一种微生物(现在的目标是真菌类)能够有效的分解玉米秸杆成为单糖,所以要寻找各类微生物,如果能都
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/17 05:42:21
微生物实验怎么配培养基的成分啊?能详细到各类微生物更好因为要做的实验是寻找一种微生物(现在的目标是真菌类)能够有效的分解玉米秸杆成为单糖,所以要寻找各类微生物,如果能都
微生物实验怎么配培养基的成分啊?
能详细到各类微生物更好
因为要做的实验是寻找一种微生物(现在的目标是真菌类)能够有效的分解玉米秸杆成为单糖,所以要寻找各类微生物,如果能都说一下的话就太好了
实验的目的是分离出十组以上能高效分解纤维素的菌株,所以算是广撒网了,取样包括枯枝败叶,污水处理厂沉淀池的泥,垃圾处理厂的样,还有家畜粪便等
微生物实验怎么配培养基的成分啊?能详细到各类微生物更好因为要做的实验是寻找一种微生物(现在的目标是真菌类)能够有效的分解玉米秸杆成为单糖,所以要寻找各类微生物,如果能都
如果是需要真菌,可以选用马丁氏培养基.
马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基.此培养基是由葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、孟加拉红(玫瑰红,Rose Bengal)和链霉素等组成.其中葡萄糖主要作为碳源,蛋白胨主要作为氮源,KH2PO4和MgSO4·7H2O作为无机盐,为微生物提供钾、磷和镁离子.而孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂,对真菌无抑制作用,因而真菌在这种培养基上可以得到优势生长,从而达到分离真菌的目的.
马丁氏培养基配方如下:
KH2PO4 1g
MgSO4·7H2O 0.5g
蛋白胨 5g
葡萄糖 10g
琼脂 15-20g
用蒸馏水定容至1000ml
此培养液1000ml加1%孟加拉红水溶液3.3ml.
由于链霉素受热容易分解,所以临用时,将培养基溶化后待温度降至45℃左右时才能加入.可先将链霉素配成1%的溶液,在100ml培养基中加1%链霉素液0.3ml,使每毫升培养基中含链霉素30μg.
问题是要看你培养什么微生物,培养基有很多种!你能把问题补充完整么?如果你也说不好,那我就把知道的都告诉你吧!
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培养基的配制与灭菌
1目的
1.1了解并掌握培养基的配制、分装方法
1.2掌握各种实验室灭菌方法及技术。
2原理
培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型,对营养物质的要求也各不相同,加之实验和研究的目的不同,所以培养基的种类很多,使用的原料也各有差异,但从营养角度分析,培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机...
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培养基的配制与灭菌
1目的
1.1了解并掌握培养基的配制、分装方法
1.2掌握各种实验室灭菌方法及技术。
2原理
培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型,对营养物质的要求也各不相同,加之实验和研究的目的不同,所以培养基的种类很多,使用的原料也各有差异,但从营养角度分析,培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外,培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。
琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质,是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98~100℃下融化,于45℃以下凝固。但多次反复融化,其凝固性降低。
任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌,以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。
3材料
3.1器皿及材料
天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。
3.2药品试剂
蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。
4流程
称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。
5步骤
5.1培养基的制备
5.1.1称量药品
根据培养基配方依次准确称取各种药品,放入适当大小的烧杯中,琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速。
5.1.2溶解
用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中,在放有石棉网的电炉上小火加热,并用玻棒搅拌,以防液体溢出。待各种药品完全溶解后,停止加热,补足水分。如果配方中有淀粉,则先将淀粉用少量冷水调成糊状,并在火上加热搅拌,然后加足水分及其它原料,待完全溶化后,补足水分。
5.1.3调节pH
根据培养基对pH的要求,用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。测定pH可用pH试纸或酸度计等。
5.1.4溶化琼脂
固体或半固体培养基须加入一定量琼脂。琼脂加入后,置电炉上一面搅拌一面加热,直至琼脂完全融化后才能停止搅拌,并补足水分(水需预热)。注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。
5.1.5过滤分装
先将过滤装置安装好(图3-1)。如果是液体培养基,玻璃漏斗中放一层滤纸,如果是固体或半固体培养基,则需在漏斗中放多层纱布,或两层纱布夹一层薄薄的脱脂棉趁热进行过滤。过滤后立即进行分装。分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口,以免浸湿棉塞, 引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5,半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜;分装三角瓶,其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。
5.1.6包扎标记
培养基分装后加好棉塞或试管帽,再包上一层防潮纸,用棉绳系好。在包装纸上标明培养基名称,制备组别和姓名、日期等。
5.1.7灭菌
上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌。普通培养基为121℃20min,以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份。培养基经灭菌后,如需要作斜面固体培养基,则灭菌后立即摆放成斜面(图3-2),斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜;半固体培养基灭菌后,垂直冷凝成半固体深层琼脂。
5.1.8倒平板
将需倒平板的培养基,于水浴锅中冷却到45~50℃,立刻倒平板。
5.2灭菌方法
灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物,灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实验主要介绍物理方法的一种,即加热灭菌。
加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌体内蛋白质凝固变性,从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关,含水量越高,其凝固所需要的温度越低。在同一温度下,湿热的杀菌效力比干热大,因为在湿热情况下,菌体吸收水分,使蛋白质易于凝固;同时湿热的穿透力强,可增加灭菌效力。
5.2.1.高压蒸汽灭菌法
高压蒸汽灭菌用途广,效率高,是微生物学实验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时,水蒸气的温度升高到121℃,经15~30min,可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌(图3-4)。
5.2.1.1操作方法和注意事项如下
加水
打开灭菌锅盖,向锅内加水到水位线。立式消毒锅最好用已煮开过的水,以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够,防止灭菌过程中干锅。
装料、加盖
灭菌材料放好后,关闭灭菌器盖,采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋,使蒸汽锅密闭,勿使漏气。
排气
打开排气口(也叫放气阀)。用电炉加热,待水煮沸后,水蒸气和空气一起从排气孔排出,当有大量蒸汽排出时,维持5min,使锅内冷空气完全排净。
升压、保压和降压
当锅内冷空气排净时,即可关闭排气阀,压力开始上升。当压力上升至所需压力时,控制电压以维持恒温,并开始计算灭菌时间,待时间达到要求(一般培养基和器皿灭菌控制在121℃,20min)后,停止加热,待压力降至接近“0”时,打开放气阀。注意不能过早过急地排气,否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外。
灭菌后的培养基空白培养
灭菌后的培养基放于37℃培养箱中培养,经24h培养无菌生长,可保存备用;斜面培养基取出后,立即摆成斜面后空白培养;半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后,空白培养。
5.2.2干热灭菌法
通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌的物品包装就绪后,放入电烘箱中烘烤,即加热至160~170℃维持1~2h。
干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。凡带有胶皮的物品,液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。
5.2.2.1灭菌前的准备
玻璃器皿等在灭菌前必须经正确包裹和加塞,以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下:平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内;三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸,用棉绳以活结扎紧,以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染;吸管以拉直的曲别针一端放在棉花的中心,轻轻捅入管口,松紧必须适中,管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去,灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌,也可用纸条斜着从吸管尖端包起,逐步向上卷,头端的纸卷捏扁并拧几下,再将包好的吸管集中灭菌。
5.2.2.2干燥箱灭菌
将包扎好的物品放入干燥烘箱内,注意不要摆放太密,以免妨碍空气流通;不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的温度升至160~170℃并恒温1~2h,注意勿使温度过高,超过170℃,器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃器皿,温度为120℃持续30分钟即可。温度降至60~70℃时方可打开箱门,取出物品,否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。
用此法灭菌时,绝不能用油、蜡纸包扎物品。
5.2.2.3火焰灭菌
直接用火焰灼烧灭菌,迅速彻底。对于接种环,接种针或其它金属用具,可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。此外,在接种过程中,试管或三角瓶口,也采用通过火焰而达到灭菌的目的。
6结果
6.1记录各种不同物品所用的灭菌方法及灭菌条件(温度、压力等)。
6.2试述高压蒸汽灭菌的过程及注意事项。
收起
各种微生物的种类不同,培养基的成分就不同。牛肉膏蛋白胨
或者琼脂类型的。琼脂和蔗糖,激素,矿质元素。还有PH值,你说的不完整,所以不好回答。
看你的主要目标是哪种微生物了,一般来说肯定会有肉汤或者琼脂,如果你要培养的菌可以再有机环境中生长,可以加点草酸纳,根据所需要的菌生长条件不同配置不同的培养基,比如巴氏杆菌就需要血平板培养,说下详细的,我帮你
I 牛肉膏蛋白胨培养基
配方: 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g、NaCl 5.0g、琼脂 20.0g、自来水 1000mL、pH7.0。
II 高氏一号培养基
配方:可溶性淀粉 20g、KNO3 1.0g、K2HPO4 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g、琼脂 20g、蒸馏水 1000mL、pH 7.2~7...
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I 牛肉膏蛋白胨培养基
配方: 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g、NaCl 5.0g、琼脂 20.0g、自来水 1000mL、pH7.0。
II 高氏一号培养基
配方:可溶性淀粉 20g、KNO3 1.0g、K2HPO4 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g、琼脂 20g、蒸馏水 1000mL、pH 7.2~7.4。
III 马铃薯培养基 用以分离培养霉菌、酵母菌。
配方:
马铃薯(去皮) 200 g
葡萄糖(或蔗糖) 20 g
琼脂 20 g
水 1000 mL
pH自然 121℃灭菌30 min
IV 察氏培养基 适合于鉴定多数霉菌。
配方:
蔗糖 30 g
K2HPO4 1 g
KCl 1 g
NaNO3 2 g
MgSO4·7H2O 0.5 g
FeSO4·7H2O 0.01 g
水 1000 mL pH 6.7
V 马丁(Martin)孟加拉红培养基
配方:
葡萄糖 10 g
蛋白胨 7 g
K2HPO4 1.0 g
MgSO4·7H2O 0.5 g
孟加拉水溶液(1/3000) 100 mL
水 800 mL
121℃灭菌30 min;
VI 麦芽汁培养基
配方:
麦芽汁 20 g
蛋白胨 1 g
葡萄糖 20 g
水 1000 mL
琼脂 20 g
pH 5
VII 豆芽汁培养基 适用于酵母和霉菌。
配方:
黄豆芽(或绿豆芽) 100 g
白糖(或蔗糖) 10~30 g
琼脂 20 g
水 1000 mL
先将洗净的豆芽放在水中煮沸30 min,用2层纱布滤去豆芽,将豆芽汁补足水分,加糖(培养酵母时糖量要高)pH自然。
收起
细菌,放线菌和真菌如果都长在一个培养基上会相互抑制的,而且细菌比其他微生物长得都快。
所以如果真的每类微生物都想培养出来,那就分别用不同的培养基。
如果定向只想培养真菌的话就用马丁氏培养基,配方上面都有了。能够抑制细菌的生长。我们去年做实验就用过,效果挺好的。...
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细菌,放线菌和真菌如果都长在一个培养基上会相互抑制的,而且细菌比其他微生物长得都快。
所以如果真的每类微生物都想培养出来,那就分别用不同的培养基。
如果定向只想培养真菌的话就用马丁氏培养基,配方上面都有了。能够抑制细菌的生长。我们去年做实验就用过,效果挺好的。
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