求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/15 10:02:06

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植物材料
用最精确的方法,称取不超过100mg的植物材料,置于处理过的研钵,加入液氮进行研磨
将研磨得到的粉末,快速转移至无RNase,并经过液氮冷却的2mL离心管(自备),注意材料要保持冷冻状态
加入450µL Buffer RLT（1mL 加入10μL β-巯基乙醇）,颠倒混匀,涡旋
将溶解物转移至于淡紫色的QIAshredder spin column,最大转速离心2分钟,取上清转移至新的2mL的收集管（自备）
加0.5倍体积（约225μL）的无水乙醇,迅速吹打混匀
将样品(约650μL )转移至带有2mL回收管的粉色RNeasy spin column（以下简称column）,>=8000g离心15s,将滤出物丢弃
加入700µL Buffer RW1至column,>=8000g离心15s清洗柱子上的滤膜,丢弃滤出物和收集管
转移column至新的收集管（提供）,加入500 µL Buffer RPE,>=8000g离心15s清洗柱子上的滤膜,丢弃滤出物
再加入500µL Buffer RPE,>=8000g离心2分钟清洗柱子上的滤膜
(为了保证除净Buffer RPE,可弃旧的收集管和滤出物,取新收集管(自备)
最大转速离心1分钟)
转移RNeasy spin column至1.5mL收集管（提供）,加入30-50µl 无RNA酶的水于滤膜上,>=8000g离心1分钟,洗脱RNA
（如果预期得到的RNA大于20µg,可重复第十步）
或者看说明书最好了

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