鉴定DNA时,溶解DNA的溶剂是酒精还是Nacl?Nacl能否用0.015mol/L的?对于二者有无区别?

鉴定DNA时,溶解DNA的溶剂是酒精还是Nacl?Nacl能否用0.015mol/L的?对于二者有无区别?
鉴定DNA时,溶解DNA的溶剂是酒精还是Nacl?Nacl能否用0.015mol/L的?
对于二者有无区别?

鉴定DNA时,溶解DNA的溶剂是酒精还是Nacl?Nacl能否用0.015mol/L的?对于二者有无区别?
一 教学目的
1.初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法.
2.观察提取出来的DNA物质.
二 教学建议
在本实验的教学中,教师应注意以下几点.
1.实验材料必须准备充足.本实验所用的实验材料是鸡血细胞液,由活鸡的鲜血经沉淀后获得.每组(2个学生)需用5 mL 鸡血细胞液,则每班(50人)至少需要130 mL,而鸡血细胞液与鸡血的体积比为1:3,这样每班至少需要390 mL 鸡血细胞液.宰杀1只中等大小的活鸡,一般可得120 mL 左右的鲜血,因此,1个班实验需要买4只活鸡.如果不具备购买活鸡的条件,也可以到市场售活鸡处去索取鸡血,但所带烧杯中必须提前放入抗凝剂.
2.盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器.鸡血细胞破碎以后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就会更少.因此,实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管,这样可以减少提取过程中DNA的损失.
3.获取较纯净的DNA的关键步骤.
(1)充分搅拌鸡血细胞液DNA存在于鸡血细胞的细胞核中.将鸡血细胞液与蒸馏水混合以后,必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使鸡血细胞加速破裂,并释放出DNA.
(2)沉淀DNA时必须用冷酒精实验前必须准备好大量的体积分数为95%的酒精,并在冰箱(至少5S以下)中至少存放24 h.
(3)正确搅拌含有悬浮物的溶液实验步骤3、5、7,都需要用玻璃棒搅拌.教师应提醒学生注意,在进行步骤3、5时,玻璃棒不要直插烧杯底部,而且搅拌要轻缓,以便获得较完整的DNA分子.进行步骤7时,要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间,用手缓慢转动510 min.
三 参考资料
实验原理的补充介绍
1.DNA的释放 DNA位于鸡血细胞的细胞核中,正常情况下不会释放出来.为了使DNA从细胞核中释放出来,实验中采用了向鸡血细胞液中加入蒸馏水并且搅拌的方法.蒸馏水对于鸡血细胞来说,是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞破裂.同时,再加上搅拌的机械作用,就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂),于是释放出DNA,当然也有RNA.但是,释放出来的大量DNA和RNA往往与蛋白质结合在一起.
2.将DNA与蛋白质分离 根据二者的特性,即在浓度较高的氯化钠溶液(物质的量浓度为2 moL/L )中,核蛋白容易解聚,游离出DNA.而DNA在浓度较高的氯化钠溶液中的溶解度很高,Na+与带负电的DNA结合成DNA钠盐.这时DNA在溶液中呈溶解状态.
3.DNA的析出与获取 利用DNA在浓度较低的氯化钠溶液中溶解度小的原理,向含有DNA的浓度较高的氯化钠溶液中加入大量(300 mL )蒸馏水,稀释氯化钠溶液,使DNA的溶解度下降,而蛋白质的溶解度增高(这就是蛋白质的盐溶现象),从而使二者分离.这时,加上不停地搅拌,溶解度下降的DNA逐渐呈丝状物.再通过过滤,滤去蛋白质,就可以获取DNA的黏稠物了.如果采用离心法则更好,用4 000 r/min 的旋转频率,离心15 min ,除去上清液(含有蛋白质),留下的沉淀物中含DNA.
4.DNA的再溶解 再用较高浓度的氯化钠溶液去溶解DNA黏稠物.
5.DNA的沉淀和浓缩 除去了蛋白质的核酸溶液,必须再进一步沉淀和浓缩.最常用的方法是酒精沉淀法.就是将含有Na+的DNA溶液,加入到相当于其两倍体积的体积分数为95%冷酒精溶液中,混匀以后可以使DNA沉淀、浓缩,形成含杂质较少的DNA丝状物,悬浮于溶液中.如果出现的丝状物较少,可以将此混合液再放入冰箱中冷却几分.浓缩后的DNA丝状物,可以用缓缓旋转玻璃棒的方法卷起(因为玻璃棒有吸附DNA的作用).
6.DNA的鉴定 本实验中鉴定DNA的方法为二苯胺法(配方见下述的“药品配制”).二苯胺法的原理是:DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成ω-羟基-γ酮基戊醛,它再和二苯胺作用而显现蓝色(溶液呈浅蓝色).
鉴定时溶液蓝色的深浅,与溶液中DNA含量的多少有关.
二苯胺试剂的配制
A液：15 g二苯胺溶于100 mL 冰醋酸中,再加15 mL浓硫酸,用棕色瓶保存.如冰醋酸呈结晶状态,则需加温后待其熔化,再使用.

是Nacl.DNA在0.14mol/L的Nacl溶液中溶解度最小，而在其他浓度（高于或低于此浓度），溶解度都比较大。
酒精不能溶解DNA。

是Nacl,不能用0.0015mol/L的，要用2mol/L的。

补充：
在DNA粗提取实验中，用2mol/L的NaCl溶液溶解第一次提取物，边加水边用玻璃棒搅拌，直至烧杯中出现白色絮凝物。
高中的DNA实验中，没有要求计算加水的体积，只要目测到有絮状物出现，溶液中NaCl约为0.14mol/L即可。