用氯化钙制备感受态细胞的做转化后一个菌落都张不出的原因我是按照文献步骤做的呀1、取大肠杆菌原始菌株（无外源质粒）单菌落接种于5mlLB培养液中,37℃,摇荡过夜；2、取1ml过夜培养

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/11/15 23:46:47

用氯化钙制备感受态细胞的做转化后一个菌落都张不出的原因我是按照文献步骤做的呀1、取大肠杆菌原始菌株（无外源质粒）单菌落接种于5mlLB培养液中,37℃,摇荡过夜；2、取1ml过夜培养
用氯化钙制备感受态细胞的做转化后一个菌落都张不出的原因我是按照文献步骤做的呀
1、取大肠杆菌原始菌株（无外源质粒）单菌落接种于5mlLB培养液中,37℃,摇荡过夜；
2、取1ml过夜培养物接种于100mlLB培养液中,37℃振荡培养3—4小时,待细菌达到对数生长期（OD600为0.5-0.6）即可；
3、将培养液转移到两只预冷的50ml无菌离心管中,置冰上10分钟,使菌液冷却到0℃ 3000rpm、4℃离10min；
4、弃上清,每只离心管加入10ml冰冷的0.05%无菌CaC12将菌体重悬,冰浴放置30分钟,3000rpm、4℃离心10min；
5、每只离心管加入2ml冰冷保存液0.05%的Cacl2+甘油重悬沉淀,将两管混合,按每样200ul分装于无菌1.5ml离心管中；
6、迅速放置于-80℃保存备用.

用氯化钙制备感受态细胞的做转化后一个菌落都张不出的原因我是按照文献步骤做的呀1、取大肠杆菌原始菌株（无外源质粒）单菌落接种于5mlLB培养液中,37℃,摇荡过夜；2、取1ml过夜培养
可能性很多.
1、感受态不好.“待细菌达到对数生长期（OD600为0.5-0.6）”,你测OD了吗?其实很麻烦,建议稍微有点混就好用了；感受态细菌在无抗生素培养基上能否生长?
2、菌株与质粒不兼容.
3、转化体系也很关键.DNA宁可少点,多了影响效率.
4、DNA是否正确,至少是环状的.有无做超螺旋质粒的阳性对照?如果你做的是质粒构建的话,转化效率很低,有个对照会很好判断意外.
5、转化过程的操作.热休克、和复苏是否正确?复苏时不能加抗生素?
6、培养基是否正确?
建议做阳性对照（质粒）和阴性对照（没转化的感受态不能生长）,有了对照结果就好判断了

你转化是怎么做的？会不会是转化没做好，质粒用的是什么质粒，标准品吗？会不会是质粒不好用，或者是抗性搞错了。

用氯化钙制备感受态细胞的做转化后一个菌落都张不出的原因我是按照文献步骤做的呀1、取大肠杆菌原始菌株（无外源质粒）单菌落接种于5mlLB培养液中,37℃,摇荡过夜；2、取1ml过夜培养用氯化钙怎样制备新鲜的大肠杆菌感受态细胞? 用氯化钙怎样制备新鲜的大肠杆菌感受态细胞? 氯化钙制备感受态细胞的原理感受态细胞的制备及转化平板上菌落的多少跟什么原因相关为什么大肠杆菌感受态细胞制备和转化转化实验为什么要先用液态的LB后用固态的培养基呢? 氯化钙制备感受态细胞的方法常用在细菌上,能不能用在酵母菌上啊?如果不能的话,转化酵母菌用什么办法? cacl2法制感受态细胞：最近用此法制备感受态细胞,但是转化后的效率很低,几天看看平白机会一个没有长.哪位大侠讲讲经验呀,制备感受态细胞及转化时应特别注意什么,好像它们好脆弱,懂不用CaCl2制备感受态细胞怎么总是失败我都是按照文献的步骤做的.最后用50ng/μl的DNA稀释10倍,取0.5μl去转化结果板上只长了不到10个菌落,为什么会这样啊?我已经做过很多次了都差不多~ 为什么用氯化钙制备感受态细胞?那钙离子又是怎样影响细胞壁发生改变的? 感受态细胞制备中,加了两次氯化钙,它们的作用分别是什么? 大肠杆菌感受态细胞制备中,第八步中氯化钙溶液中甘油的作用是什么在制备感受态细胞的实验中氯化钙需要避光吗? 制备感受态细胞时为什么氯化钙要冷冻感受态细胞的制备·转化·细胞转染·菌种培养相关方法及原理 BJ5183细胞感受态的制备我之前用拿来的BJ5183菌液划板挑单菌落,然后扩大培养保存菌种.最近用该菌种用氯化钙法制备感受态细胞然后用pShuttel-CMV转染（连上了目的基因）,但是Kna板子上培养了为什么我用DH5感受态细胞转化,用kana,14h后都长不出菌落?已经做了很多次了,我操作没问题没人回答？大肠杆菌转化的机理与感受态细胞的制备方法的研究进展（希望答案详细）

用氯化钙制备感受态细胞的做转化后一个菌落都张不出的原因 我是按照文献步骤做的呀1、 取大肠杆菌原始菌株（无外源质粒）单菌落接种于5mlLB培养液中,37℃,摇荡过夜；2、 取1ml过夜培养

用氯化钙制备感受态细胞的做转化后一个菌落都张不出的原因我是按照文献步骤做的呀1、取大肠杆菌原始菌株（无外源质粒）单菌落接种于5mlLB培养液中,37℃,摇荡过夜；2、取1ml过夜培养