如何从发酵液中分离一个蛋白酶?如何测定其表达量和酶活?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/16 04:31:09

如何从发酵液中分离一个蛋白酶?如何测定其表达量和酶活?
如何从发酵液中分离一个蛋白酶?如何测定其表达量和酶活?

如何从发酵液中分离一个蛋白酶?如何测定其表达量和酶活?
首先,去除菌体和残余的发酵液,一般高速离心就可以,5000r/min离心1min.取上清.此部要根据蛋白质的特点来做.若果蛋白酶是在细胞内那么要先破碎细胞,如果该酶的分子量过大,那么要减小离心转速.
其次,蛋白酶溶液中根据酶的性质,处理纯化或提取.常用方法是有机溶剂提取法,阴、阳离子交换柱层析发,液相色谱法等.这要根据蛋白质的性质,是否带电荷带什么电荷等.
关于酶活,应该每一步都要测定酶活,可用该酶分解蛋白质的特点,看一定的酶量在单位时间里分解蛋白的量,如果有特殊吸收峰的话可用紫外分光光度计测吸光度.
表达量,一般定量表达,常用方法是基因水平Realtime-PCR,蛋白水平,westen-blot法.也可参考其他相关文献的方法.

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