为什么克隆菌总是提不出质粒用的是生工的试剂盒没有问题 菌长的很好也不是一点提不出来就是量特别少不正常

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/14 05:26:41

为什么克隆菌总是提不出质粒用的是生工的试剂盒没有问题 菌长的很好也不是一点提不出来就是量特别少不正常
为什么克隆菌总是提不出质粒
用的是生工的试剂盒没有问题 菌长的很好也不是一点提不出来就是量特别少不正常

为什么克隆菌总是提不出质粒用的是生工的试剂盒没有问题 菌长的很好也不是一点提不出来就是量特别少不正常
既然都挑了单克隆了,说明你的转化是成功的.至于为什么提不出质粒,首先,要确定你摇菌之后是否有足够的菌长出来了.然后,再确定你提质粒的步骤是否正确,不知道你是用的试剂盒还是自己配的溶液.最后,你需要确保你所用的试剂是没有问题的,是不是忘加东西了,比如RNA酶或者乙醇什么的.提好质粒后可以用分光光度计测一下浓度,或者跑一下胶,以确认是否提出了质粒.

你的试剂盒用了多久？如果时间过久，洗蛋白除杂质的buffer中乙醇会挥发，影响回收率；再有我感觉是你加入溶液B时颠倒混匀过于剧烈，这步对质粒提取量影响很大，加溶液A、B快速混匀震荡都没问题，加B时一定轻轻颠倒混匀，望实验顺利，望采纳，有问题随时交流！...

全部展开

你的试剂盒用了多久？如果时间过久，洗蛋白除杂质的buffer中乙醇会挥发，影响回收率；再有我感觉是你加入溶液B时颠倒混匀过于剧烈，这步对质粒提取量影响很大，加溶液A、B快速混匀震荡都没问题，加B时一定轻轻颠倒混匀，望实验顺利，望采纳，有问题随时交流！

收起

无外乎于试剂盒不合适，菌液过少，或过多导致裂解不充分。
试剂盒问题比较大，可以其他菌液做个对照，就很清楚了
当然如果是农杆菌的话，那质粒量少是很正常的，不像大肠杆菌质粒那么容易提取出来。

为什么克隆菌总是提不出质粒用的是生工的试剂盒没有问题 菌长的很好也不是一点提不出来就是量特别少不正常 耐热菌的基因克隆为什么提取基因组后,酶切总是切不开 酶切后PCR一条带都没有 但原质粒PCR有条带 为什么做MUCIN基因 从扩增、 切胶纯化、 加A 、T载体链接、 转入感受态 到挑克隆鉴定出阳性克隆 最后提质粒 取一部分提出的质粒双酶切 质粒与酶 为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急加点 kml?但是我转化后菌落长的还可以啊.酶切目的带在1000左右,质粒PCR在750左右了 谁说说质粒载体pet 22b的一些特点以及它作为质粒载体在DNA克隆中的优势? 天根质粒小提试剂盒提大肠杆菌质粒,浓度偏低的原因?最近在做载体构建,好不容易检测到了阳性克隆,准备摇菌提质粒进行酶切鉴定,进而测序.摇菌12-16小时后 用天根小提质粒试剂盒提取质粒, 请问我用菌液电泳检验克隆是否是阳性的时候,为什么只有一条DH5a的基因组带,而没有质粒条带 重组质粒构建 一个DNA为什么要接入两个不同的载体?重组质粒构建方法将从荧光假单胞菌2P24基因组中克隆的phlD基因与载体pMDl8一T相连,构建重组质粒pMDl8一T：：phlD,并将该质粒上的phlD切下与 应用COS质粒载体克隆外源基因的一般程序是什么? 影响质粒载体进行外源DNA片段克隆是主要考虑的有哪些因素 pCAMBIA1301和目的基因质粒,都用Kpn I 和Xho I双酶切,回收后亮度挺好的,为什么连接转化总是不长 为什么说多利是克隆出来的? 如何克隆质粒复制子? 什么是克隆质粒 提质粒用的大肠杆菌为什么要培养2代 分子克隆的时候,提出的质粒用菌落PCR是阳性的,但是酶切鉴定的时候却没有切出来目的条带,是怎么回事呢? 为什么基因工程的工程菌的重组过程要用人生长激素基因与质粒结合?用别的基因与质粒结合可以么? 为什么说多利羊的克隆不是真正意义上的克隆?