基因功能验证前都有哪些工作:就是从提取RNA到最后的基因功能验证之间有哪些工作要做
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/10/06 21:37:58
基因功能验证前都有哪些工作:就是从提取RNA到最后的基因功能验证之间有哪些工作要做
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通常的基因功能验证程序:
1. 提取RNA
2. 反转录成cDNA
3. 设计引物(需要考虑酶切位点了,为了将来连接到载体上)
4. PCR扩增基因.
5.将PCR产物连接到T-载体上
6.连接产物做转化.
7. 挑单克隆摇菌,PCR或酶切鉴定是否连接上.
8.测序验证PCR获得的基因没有突变位点.
9. 将正确的基因从T-载体上酶切下来,回收.
10. 再连接到目的载体上.
11.同样转化、挑单克隆,PCR或酶切鉴定是否正确连接.
12.取正确的载体转染细胞验证在细胞中的功能.
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