作业帮如何从植物细胞中制备大分子量的DNA
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/11/06 08:06:45
如何从植物细胞中制备大分子量的DNA
如何从植物细胞中制备大分子量的DNA
如何从植物细胞中制备大分子量的DNA
以玉米叶片的DNA提取为例
1 取3-5g新鲜的幼嫩的玉米叶片,或者取完材料后将其冻存于液氮中或保存在－70℃备用；
2将冷冻的叶片置于研钵中,加入少许石英砂,浇液氮研成细粉后,转入50 mL的离心管中,加入15ml 65ºC预热的2×CTAB抽提缓冲液,再加入150µlβ-巯基乙醇（终浓度为1%）；
3 于65ºC温育1小时,中间间断的颠倒混匀几次,并开盖放几次气；
4 于冷水盆中冷却至室温后,加入等体积的氯仿∶异戊醇（24∶1）,快速上下颠倒混匀15分钟,然后于室温（>15℃）10000rpm离心10分钟.
5 取上清于新的干净的离心管中,加入0.8×体积异丙醇,混匀后于室温静置15分钟,用滴管将絮状沉淀挑出至一新的7.5ml的离心管中,加入76％的乙醇、乙酸钠洗涤片刻.
6 然后将溶液倒出,加入70%乙醇中洗沉淀2－3次.
7 将沉淀于37℃烘箱中凉干后溶于适量的（约2ml）TE中,加入含有去DNA酶的RNA酶（0.1%）于65℃进行消化30min左右,使其充分溶解,再放入37℃水域中消化1h.
8 加入0.5体积的酚进行抽提样品,即来回上下颠倒混匀15min左右,然后于微量离心机中10000rpm离心10min.
9 转移上清于另一新的7.5ml的离心管中,用TE补足原体积,在用等体积的氯仿∶异戊醇（24∶1）进行抽提15min,然后在室温条件下于离心机中以10000rpm转离心10min,并再次转移上清于一新的离心管中.
10 向离心管中加入1/10体积的76％的乙醇、乙酸钠,再加入2.5倍体积的无水乙醇沉淀DNA,于－20℃放置20分钟左右,然后用枪头将DNA挑出至新的1.5ml的离心管中.
11 向沉淀中加入70％的乙醇洗涤2―3次,并再次于烘箱中凉干,用300ulTE进行溶解DNA,于－20℃保存备用.