要配置多少的酶切体系,载体和插入DNA的量要加多少?

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/11/14 14:47:47

要配置多少的酶切体系,载体和插入DNA的量要加多少?
要配置多少的酶切体系,载体和插入DNA的量要加多少?

要配置多少的酶切体系,载体和插入DNA的量要加多少?
因为内切酶的酶活性单位定义是在50ul反应体系中,最适温度反应1小时能够讲1ugDNA完全酶切的酶量.所以,一般在酶切体系里,DNA的量是可以加到非常大的.因为考虑到后期的纯化后DNA的损失问题,所以推荐酶切体系中的DNA尽量多加一些.这样你纯化回收后的DNA剩下的就比较多,有利于后期的连接以及筛选.具体的话,我经常做的就是50ul体系中除了buffer和酶以外,其他的成份全部都是载体或者插入片段的溶液.当然,你得保证你的DNA浓度约可以达到50ng/ul左右的浓度.最后,做连接的时候一定要注意插入片段和载体的摩尔比,理想状态下应该是3-10比1.

要配置多少的酶切体系,载体和插入DNA的量要加多少? 如何将两个外源基因导入到一个质粒载体?有一段平末端编码人VEGF基因的DNA片段,怎样将其插入到含有EcoRI和BamH I限制位点的PET28a载体中去?插入后重组载体转化大肠杆菌DH5.我们要插入这个外源 Xho1和Nde1 50μl双酶切反应体系的配制?用Xho1和Nde1对载体质粒和目的片段分别进行双酶切,50μl的酶切体系应该怎样配制?我不知道每种试剂加多少好?(PS:反应体系中要用到BSA). 目的基因通过载体进入到受体细胞后,和载体一起复制共存,还是插入到细胞内的DNA上了? DNA的载体是什么 【求助/交流】请问大家:将外源DNA与载体连接的体系怎么确定啊? 【求助/交流】请问大家:将外源DNA与载体连接的体系怎么确定啊? 需要插入载体的外源DNA是不是必须有两个相同的限制性位点?要不它怎么插入载体中呢 关于转基因的危害只要有相似的结构都会被切?就是说,同一种酶切割同一个DNA,会切出许多完全不同的片段?然后接着以某些载体把这片段插入到受体的DNA上.那么如何确保载体装载的片段是正 细胞核中的蛋白质和DNA都是遗传信息的载体 可以说叶绿体和线粒体是DNA的载体吗?为什么? 染色体是遗传物质DNA和RNA的载体么?为什么 DNA不是基因的载体?怎么才算是载体 遗传信息的载体是DNA,什么事载体啊 载体质粒不就是外源DNA的载体吗? 将DNA插入人体细胞基因组中适合的载体是反转录病毒,为啥?为啥不是质粒或噬菌体DNA 请教一个双元表达载体的问题,双元表达载体系统代表农杆菌转化需要两个质粒吗?一个是含有插入位点能够插入目标基因的mini载体含有能够被转移的T-DNA,另一个是卸甲载体不含T-DNA只含有Vir 病毒DNA如何插入人体的DNA怎么插入,为什么能够插入…要详细点的回答…