哪位高人看过PCR跑电泳跑成这个样子的?这是什么原因造成的?望指教.
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/08/31 19:42:46
哪位高人看过PCR跑电泳跑成这个样子的?这是什么原因造成的?望指教.
哪位高人看过PCR跑电泳跑成这个样子的?这是什么原因造成的?望指教.
哪位高人看过PCR跑电泳跑成这个样子的?这是什么原因造成的?望指教.
如果最亮的带是你的目的带,那就是拖尾而不是杂带,问题不大.
要是顺便点了marker,问题很容易看出来,因为如果marker也拖尾的话,自然可以判断是电泳的问题.现在没有marker,但也首先怀疑是这个问题,原因可能有2:点样量过高(那要pcr产物量相当高),TAE(是否用水配了胶?)或者琼脂糖有问题.
解决办法:减少点样量,点marker一起跑;同时重新配胶、换TAE,换其他牌子或批号的琼脂糖(如果此前这个琼脂糖没问题可不换);电泳电压别太高.
如果按上述方法后marker不拖尾,但样品还拖尾,就是pcr的问题,最大的可能是模板两过高(但从你的图中看,你向后拖尾呈彗尾状,而不是呈等宽涂抹状,我觉得还是电泳问题,模板过高的可能小).解决办法,把模板稀释100-1000倍,你的带挺亮的,应该好p.
若有疑问,欢迎继续讨论,纯属手打,欢迎采纳,祝实验顺利!
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又看了你图,补充点,为什么你的带在胶中是斜的?要么是胶漂歪了,要么是电泳仪有点问题,检查下你的铂金丝是不是断了或歪了……
很可能是TAE溶液太少了,我以前就跑过这样的条带,加了TAE就没问题了。
你PCR的条件是什么,模板有没有问题,退火温度是不是低了?下次最好点上marker。造成拖尾如此之严重的原因可能是缓冲液有问题,pH有没有弄错,缓冲液离子强度呢?造成目标产物位移不均一可能是你凝胶方歪了,这道问题不大,但如果PCR时退火温度太低,造成非特异扩增,哪就一定会出现象你这样的拖尾问题。...
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你PCR的条件是什么,模板有没有问题,退火温度是不是低了?下次最好点上marker。造成拖尾如此之严重的原因可能是缓冲液有问题,pH有没有弄错,缓冲液离子强度呢?造成目标产物位移不均一可能是你凝胶方歪了,这道问题不大,但如果PCR时退火温度太低,造成非特异扩增,哪就一定会出现象你这样的拖尾问题。
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